聚合酶链式反应PlymeraseChainReaction2.pptVIP

聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction PCR技术 由美国Cetus公司K.Mullis 于1983年建立 能在体外复制已知序列的DNA片段 具有扩增效率高和特异性强的特点 为生命科学领域的研究开创了崭新时代 PCR的反应体系 参与PCR反应的主要成份: 模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和 缓冲液等。 PCR的反应条件 反应温度（变性、退火、延伸） 反应时间（变性、退火、延伸） 循环次数（PCR效率及产物量） 变性温度和时间 模板DNA充分变性是PCR顺利进行的前 提。在PCR扩增开始的第一次变性时， 应给 予足够的时间和温度，使基因组DNA充分变 性。一般在940C变性5～10 min。进入循环反 应后以94℃变性30～40s, 足以使模板DNA双 链变性。 退火温度和时间 PCR反应的特异性取决于退火时引物 模板的特异结合。退火温度一般低于引物 Tm50C左右，退火温度越高，产物的特异 性也越高；被扩增片段越大，退火所需时 间也相应延长。 延伸温度与时间 延伸温度设为72℃， 因为Taq DNA聚合 酶在72℃时具较高的酶促活性，有利于DNA 的复制。延伸时间视产物长度而异，时间过 长易导致非特异性扩增。 模 板 (template) 模板就是将要被复