实验14 乳酸脱氢酶法测定血清乳酸、丙酮酸.pptVIP

* * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验14 乳酸脱氢酶法测定血清乳酸、丙酮酸 * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验14 乳酸脱氢酶法测定血清乳酸 * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验14 乳酸脱氢酶法测定血清丙酮酸 河北北方学院医学检验学院　侯丽娟 实验 14 乳酸脱氢酶法测定血清乳酸、丙酮酸 实验目的 掌握：乳酸脱氢酶法测定血清乳酸和丙酮酸的原理。 熟悉：乳酸和丙酮酸测定的临床意义及其测定的注意事项。 一、乳酸脱氢酶法测定血清乳酸 二、乳酸脱氢酶法测定血清丙酮酸 一、乳酸脱氢酶法测定血清乳酸 实验原理 反应体系中加入肼可使丙酮酸不断被转换消除，促进反应完成。于340nm波长处测定反应中生成的NADH，定量乳酸浓度。 试剂与器材 1．Tris-EDTA-肼缓冲液（pH9.8） 2．NAD＋溶液 3．LD溶液（1 500U/ml） 4．底物应用液 Tris-EDTA-肼缓冲液27ml、 NAD＋溶液3ml、LD溶液40μl混匀。 5．20mmol/L乳酸标准贮存液。 6．2mmol/L乳酸标准应用液 。 7．0.1mol/L盐酸。 8．分光光度计或自动生化分析仪。 操作步骤 0.5 0.5 0.5 底物应用液 0.01 － － 血清（或血浆） － 0.01 － 乳酸标准应用液 － － 0.01 蒸馏水 测定管 标准管 空白管 加入物（ml） 立即混匀，37℃水浴准确保温5min后立即加入0.1mol/L盐酸3ml终止反应。于340nm波长处，以空白管调零，读取各管吸光度。 计算 参考范围 血清乳酸：＜2.0mmol/L。 临床意义 高乳酸血症常见于： 1．组织严重缺氧。 2．慢性肝病、肝硬化、肝功能衰竭。 3．糖尿病和尿毒症患者。 激烈运动时可出现生理性乳酸增高，恢复时迅速降低。 注意事项 1．受试者应保持空腹及安静状态至少2h，避免手臂活动。抽血时如用止血带，应在穿刺后除去止血带至少2min后再抽血。标本放冰室保存待测。 2．如不做标准管，可根据NADH的摩尔吸光度值计算乳酸浓度，但反应条件必须标准化。 3．如使用自动生化分析仪，各实验室可根据分析仪的性能、型号设定参数。 评价 返回本实验目录 本法特异性高、操作简便，严格按取样程序采血，正偏差小，是乳酸测定的首选方法。 实验原理 二、乳酸脱氢酶法测定血清丙酮酸 通过测定340nm波长处NADH的下降速率，定量丙酮酸含量。 试剂与器材 1．0.1mol/L Na2HPO4溶液 2．0.1mol/L KH2PO4溶液 3．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4） 4．NADH溶液 5．LD溶液 (550U/ml) 6．工作试剂 NADH溶液400μl、LD溶液40μl混匀， 用0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）稀释至10 ml。 7．25mmol/L丙酮酸标准贮存液 8．0.5mmol/L丙酮酸标准应用液 9．自动生化分析仪 操作步骤 根据实验室自动生化分析仪的型号、性能设定参数。下列参数可供参考： 温度：37℃；波长：340nm；延迟时间：30s；监测时间：120s；样品体积：25μl；工作试剂体积：275μl。 分别测定样品管和标准管吸光度的下降速率。 计算 参考范围 血清丙酮酸：＜0.1 mmol/L 临床意义 血液丙酮酸的测定与血乳酸测定的临床意义相近，糖尿病、充血性心力衰竭、严重肝病、严重感染等可使血丙酮酸的含量增加，并伴有高乳酸血症; 可用于维生素B1缺乏症的诊断，维生素B1缺乏时，体内丙酮酸的氧化发生障碍，血丙酮酸的含量增加。