作物育种12细胞工程育种（2学时）宣讲培训.pptVIP

Embryogenic suspension cells were irradiated with 80Gy gamma-ray and selected with 2% NaCl. The salt-tolerant calluses were formed and then regenerated plants. Plant Cell Tiss Org Cult 2009 组织培养在育种中如何应用？ 如何利用细胞工程创造变异？ 二、原生质体培养和体细胞杂交 体细胞杂交和有性杂交 不是雌雄配子间的结合 完整遗传物质体细胞的融合 双亲染色体数的总和及全部细胞质 体细胞杂交的特点 可以在有性杂交困难的作物之间杂交成功,扩展这些作物的育种资源，并有可能利用融合之后的染色体消减和重组过程获得崭新的体细胞杂种 植物原生质体：用一定方法脱去细胞壁的裸露原生质团。 一）原生质体的分离 分离方法 机械分离 酶分离 影响原生质体分离的因素 材料来源 渗透压 酶 分离培养基 培养条件 组织前处理 原生质体的收集、纯化和活力测定 二）原生质体培养 原生质体计数 三）细胞融合（体细胞杂交） 融合方法 NaNO3处理诱发融合 高pH—高浓度钙离子处理 PEG(聚乙二醇)处理 电融合 融合方式 对称融合 将双亲的质核组装在一起的融合。 非对称融合 双亲质核没有同时融合。 细胞融合后产生三种类型的杂种： 1.综合了双亲全部遗传物质的对称杂种 2.部分遗传物质发生丢失的非对称杂种 3.只具有融合双亲一方核遗传物质的胞质杂种 融合后的细胞类型 细胞工程与作物育种 以植物组织和细胞培养技术为基础，以细胞为单位，在体外（in vitro）条件下进行培养，按人们的意愿改变细胞内的遗传结构或获得细胞产品的一门综合技术。 植物细胞工程（plant cell engineering） 组织培养在育种中如何应用？ 如何利用细胞工程创造变异？ 理论基础： 细胞的全能性（cell totipotency）每一个细胞均含有保持物种遗传性的全套遗传物质，具有再发育成一个完整生物体的能力。 由高等植物的细胞、组织和器官培养成植株的过程。 二） 幼胚培养与植物育种 1 通过胚拯救克服远缘杂种夭亡 2 提高远缘杂种成苗率 3 种子拯救 4 打破种子休眠 三）种质资源的长期保存 离体试管保存可用较少的空间保存大量无性系。 四）植物材料快速繁殖 通过愈伤组织诱导丛生芽形成，然后分株培养。 诱导茎尖或不定芽形成丛生芽。 五）茎尖脱毒 茎尖脱毒实现无性繁殖作物的提纯复壮 六）体细胞无性系变异及其育种利用 2.体细胞无性系变异的遗传基础 染色体数目变异 多倍体、非整倍体等 1.体细胞无性系： 任何形式的细胞培养产生的植株 染色体结构变异 缺失、倒位、易位、重复 点突变 自发突变 诱发突变 基因放大和衰减 有丝分裂交换 细胞质基因突变 体细胞无性系变异 植物体细胞发生的可遗传变异 变异体： 不加任何选择压力而筛选出的变异个体 突变体： 经过施加某种选择压力而筛选出的个体 体细胞无性系突变的来源 自发无性系变异 自发产生的天然变异 诱导无性系变异 有目的的利用物理和化学因素进行处理 Carrot family lines regenerated from tissue-culture. Both have been grown for 12 weeks in a glasshouse after 10 weeks vernalisation. Family 16 (LHS) are flowering abundantly, while Family 17 (RHS) have not flowered. 自发无性系变异 水稻组培过程中产生的变异体 体细胞无性系突变的来源 自发无性系变异 自发产生的天然变异 诱导无性系变异 有目的的利用物理和化学因素进行处理 体细胞无性系变异的选择 选择时间： 组培前 组培中 组培后 培养系统 器官发生系统 胚胎发生系统 筛选方法 一步筛选 多步筛选 有些变异发生在植株的某一部分组织的细胞中，需将这部分变异的细胞从植株上分离下来进行培养，使之再生植株。 1 组织培养之前的变异及其选择 在组培过程中, 对培养物施加某种处理,使之发生变异后再进行选择。 2 组织培养期间的变异及其选择 培养基中不含有特定的选择因子，但含有诱变剂，由此产生的再生植株可能出现优异变异。 3 组织培养后的选择鉴定 再生植株由愈伤组织直接分化而成。通常,外植体先形成愈伤组织，再由愈伤组织的一部分形成类似生长锥的分化物，进而发育成幼芽；另一部分愈伤组织则分化成幼根，这两部分进一步发育和联合即形成一个新的植株。 4 培养系统的选择 A 器