双缩脲反应.ppt

试剂： 卵清蛋白溶液：将鸡（或鸭）蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，2-3层纱布过滤，滤液冷藏备用。 0.5%甘氨酸溶液： 0.5 g甘氨酸溶于蒸馏水，稀释至100 ml。 0.5%谷胱甘肽溶液：0.5 g谷胱甘肽溶于蒸馏水，稀释至100 ml。 0.5%脯氨酸溶液: 0.5 g脯氨酸溶于蒸馏水，稀释至100 ml。 2. 0.1 %茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100 ml（用时新配）。 3. 10%氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于蒸馏水，稀释至100 ml。 4. 1%硫酸铜溶液：1g硫酸铜溶于蒸馏水，稀释至100 ml。 5. 硫酸铵晶体：如颗粒较粗，最好研磨成细粉末状。 6. 饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100 ml加硫酸铵至饱和。 7. 1%醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水，稀释至100 ml。 8. 1%三氯醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100 ml。 9. 尿素。 【实验方法】 双缩脲反应: （1）试管1：取少量尿素结晶，加入干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。再加入1mL10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2-3滴1%硫酸铜溶液,混匀, 观察颜色变化 （省）。 （2）试管2，加入卵清蛋白溶液 1ml，再加入1mL10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2-3滴1%硫酸铜溶液,混匀，观察颜色变化。 （3）试管3，加入0.5%甘氨酸溶液1ml，再加入1mL 10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2-3滴1%硫酸铜溶液混匀，观察颜色变化。 （4）试管4，加入0.5%谷胱甘肽溶液1ml，再加入1mL 10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2-3滴1%硫酸铜溶液混匀，观察颜色变化。 2. 茚三酮反应 （1）试管1：加入1mL卵清蛋白溶液，再加2-3 滴0.1 %茚三酮溶液，摇匀。在沸水浴上加热10-15min，观察现象。 （2）试管2：加入1mL0.5%甘氨酸溶液，再加2-3 滴0.1 %茚三酮溶液，摇匀。在沸水浴上加热10-15min，观察现象。 （3）试管3：加入1mL0.5%脯氨酸（羟脯氨酸）溶液，再加2-3 滴0.1 %茚三酮溶液，摇匀。在沸水浴上加热10-15min，观察现象。 3.蛋白质的盐析作用 （1）取 1 支试管，加入 2ml浓蛋白质溶液和 2ml 饱和硫酸铵溶液，混匀，静置 10 分钟，球蛋白则沉淀析出。过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，至粉末不再溶解，析出的沉淀为清蛋白。静置，弃上部清液，取部分清蛋白沉淀加水稀释，观察它是否溶解。 4.重金属沉淀蛋白质 （1）试管1，加入1mL蛋白质溶液，然后分别加入1-2 滴1%硫酸铜溶液，振荡后，观察现象。 （2）试管2，加入1mL蛋白质溶液，然后分别加入1~2滴1%醋酸铅溶液，振荡后，观察现象。 【实验结果与讨论】 1. 加热试管时，试管口勿对人。 2. 溶液滴加时小心，勿伤人及桌面。 3. 试剂用完及时盖上盖，防止挥发。 4. 观察现象时，随加随摇，及时记录。 5. 设置阴性对照。 5. 药品放回原处，清点自己物品。 【注意事项】 1. 如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，此作何结论? 2. 茚三酮反应的阳性结果是否经常是同一色调? 若不是，为什么? 3. 蛋白质分子中的哪些基团可以与重金属离子作用而使蛋白质沉淀? 4. 球蛋白和清蛋白哪一种分子量大？ 【思考题】 * 生物化学（I）实验 湖南大学生物学院 何 晓 晓 化学生物传感与计量学国家重点实验室 生物纳米与分子工程湖南省重点实验室 课程名称:生物化学实验（1） 课程代码: BS04009 选用教材：学院整理讲义 授课学期：2013年秋季 授课对象：2012级生物医学工程本科 课程学分：1 课程学时：32学时 学生人数：23人 授课教师：何晓晓 授课时间:【8-13周】 星期六8:30-11:30 授课地点: 逸夫楼北栋生物医学本科实验中心 基 本 信 息 生物化学实验是我院生物技术专业和生物医学工程专业的一门十分重要的学类课程，独立设课，其并修课程是《生物化学》。按照国家教育部制定的专业目录规定要求，结合我校实际情况及培养目标的要求，本课程共开设64 学时。生物化学I实验生物化学实验的一部分，1学分，32学时，安排在大学本科第二学年的秋季进行。生物化学I实验包含验证性、操作性和综合性等多层次实验内容。通过本课程学习，达到以下目的： 课程简介与目的 1.掌握常用的生物化学实验技术 2.了解蛋白质、核酸、酶结构、性质与功能；掌握蛋白质和核酸的定性定量