功能基因组学幻灯片课件.pptVIP

* * 功能基因组学 一、概念 定义：是确定基因组所有基因及其产物的生物学功能的科学 研究方法：基因表达谱、表达蛋白质的双向凝胶电泳及质谱技术、酵母双杂交体系、基因敲入、基因敲除、噬菌体表面展示、突变体功能互补、反义RNA技术、RNA干扰 二、分子生物学基本知识 遗传信息 DNA、RNA、蛋白质、内含子 基因和基因组 原核基因的结构 操纵子模型 真核基因的结构 内含子 二、分子生物学基本知识 基因和基因组 基因表达 转录、翻译 原核细胞：一种RNA聚合酶 真核生物 转录因子：通用转录因子、激活转录因子、结构转录因子、 负调节因子 三种RNA聚合酶 RNA加工：剪切、泛编辑、插入编辑、超编辑 表观遗传：RNAi、DNA甲基化 翻译：核糖体、趾纹分析 二、分子生物学基本知识 基因和基因组 基因组：C值 原核生物的基因组：操纵子结构、重叠基因 真核生物的基因组： 非重复序列、中度重复序列、高度重复序列 隔离子：阻断周围的DNA序列之间的相互作用 沉默子：阻断增强子与反式激活因子的作用、破坏转录起始复合物，不具有方向性 基因座：基因座控制区（LCR） 基因家族 四、基因的结构与表达分析 结构分析 计算机预测、实验证实 寻找基因的重要区域 凝胶阻滞实验：用来寻找能够与蛋白质结合的DNA序列 DNA足迹法：DNA酶保护法 基因表达分析 对分离和定性的基因进行修饰，分析修饰结果 制备探针，检测mRNA分子的多少 五、原核与真核细胞表达体系 原核基因的表达调控 组成型：依赖于启动子结构 调节型：依赖于调控蛋白的活性 σ因子 终止子、ρ因子 五、原核与真核细胞表达体系 原核细胞的表达体系 大肠杆菌表达体系 遗传背景清楚，繁殖快、成本低，表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强、适用范围广 对表达的蛋白质产物不能进行翻译后修饰，高表达易发生错误折叠，容易导致表达产物没有活性，本身还有内毒素和毒性蛋白 启动子、目的基因编码序列和转录终止序列、受体细胞 非融合表达：外源基因被插入到表达载体上的强启动子和核糖体结合位点的下游，以外源基因mRNA自身的AUG为翻译起始密码 融合表达：分泌型、带纯化标签、表面呈现、带伴侣 融合方式产生的蛋白质N端带有大肠杆菌细胞蛋白质的一部分氨基酸序列 *