微生物发酵工程课件第14篇 章 代谢产物的过量生产.ppt

第十四章 代谢产物的过量生产（ Overproduction of Microbial metabolite）; 在自然界，野生型微生物细胞只合成本身所需要的物质，决不合成过量的物质。 发酵方法过量生产代谢产物，必须打破或解除微生物细胞内正常的代谢调控，使代谢产物过量生成！; 为了过量积累目的产物并提高其生产效率，就必须使微生物细胞原有的代谢途径调控系统失去控制，在保证微生物细胞正常生长的前提下，人为建立起新的代谢调控系统，使其代谢产物按要求积累。 微生物细胞可在环境改变的情况下，通过协调自身的代谢途径、改变自身的遗传物质组成来适应环境条件的变化。因此，在工业生产中常通过改变培养条件、选育基因突变株来控制微生物的代谢。 常用的方法有： 克服反馈抑制和反馈阻遏的调控； 克服分解代谢阻遏的调控； 对诱导调节的控制；;（一） 克服反馈抑制和反馈阻遏的调控; 正常的反馈抑制和反馈阻遏调节使得微生物细胞不能积累终端产物。可以采用以下方法克服反馈调节而积累终端产物。 ① 选育营养缺陷型突变株 ② 选育抗类似物突变株 ③ 选育细胞膜通透性突变株 ④ 选育营养缺陷型回复突变株 ⑤ 采用原位分离发酵技术 选育营养缺陷型突变株 营养缺陷型是指原菌株因基因突变而导致合成途径中断，丧失了合成某种（些）必需物质的能力，必须在培养基中加入该营养物质才能正常生长的突变型菌株。营养缺陷型突变株的代谢流受阻致使终端产物减少，从而解除了终端产物的反馈调节，可使代谢途径中的某一中间产物过量积累。 ;;3. 选育细胞膜通透性突变株 微生物细胞能合成的产物必须经过细胞膜和细 胞壁分泌到胞外，改变细胞膜和细胞壁的通透性， 使其有利于产物的分泌，是降低终端产物的一种 途径。 生物素是作为催化脂肪酸生物合成初始酶乙酰 CoA羧化酶的辅酶，参与了脂肪酸的生物合成， 而脂肪酸又是形成细胞膜磷脂的主要成分，从而 间接地起到干扰细胞膜磷脂合成的作用。青霉素 可通过抑制细菌细胞壁四肽侧链和五肽交连桥的 结合而??碍细胞壁的合成。; 谷氨酸生产菌黄色短杆菌：细胞膜磷脂含量降低时，细胞的通透性增强。如果向培养基中限量添加生物素、添加脂肪酸类似物或添加青霉素等抗生素，可以增加细胞膜或细胞壁的通透性，使谷氨酸易于透过，降低谷氨酸在细胞内的积累，解除反馈调节。同理，选育丧失脂肪酸合成酶的油酸缺陷型或丧失α-磷酸甘油脱氢酶的甘 油缺陷型，对于谷氨酸的积累也是有效的。;4. 选育营养缺陷型回复突变株 采用由营养缺陷型选育回复突变株的方法来选育高产菌。当一个菌株由于突变而失去某一遗传性状后，经过回复突变可以再回复其原有的遗传性状。这是因为当某一结构基因发生突变后，该结构基因所编码的酶就因结构的改变而失活。而经过回复突变后，该酶的活性中心结构可以复原，而调节部位的结构常常并没有恢复。结果是一方面酶恢复了活性，而另一方面反馈抑制却已解除或减弱。因此，可以利用营养缺陷型的回复突变来提高发酵产品的产量。;5. 采用原位分离发酵技术 采用边发酵边进行产物分离的原位分离发酵技术，可以使发酵体系中终端产物的浓度始终低于引起反馈调节的浓度。采用原位分离发酵技术在乳酸发酵过程中组合电渗析、离子交换、膜分离技术减少乳酸对发酵的抑制作用。获得了很好的效果。;菌种;克服分解代谢阻遏的方法包括： 1. 避免使用有阻遏作用的碳源和氮源 发酵生产中采用相对不易引起分解代谢阻遏的碳源或氮源，如乳糖，有机酸，豆饼粉等。 2. 流加碳源或氮源 当发酵生产必须使用有阻遏作用的碳源或氮源时，可采用过程补糖的办法限制生产菌的糖耗速 率，来降低或消除分解代谢物阻遏对酶生产的影响。如给荧光假单胞菌纤维素酶突变株缓慢补糖， 可使纤维素酶的产量增加200倍。 3. 利用抗分解代谢阻遏的突变株 在以酶受阻遏的底物为唯一碳源（氮源）的培养上，选择能生长的菌株——抗分解代谢阻遏的 突变株。如：由于脯氨酸氧化酶被葡萄糖阻遏，所以将菌株接种至葡萄糖-脯氨酸（作为唯一氮源） 平板上，未突变菌株的脯氨酸氧化酶被阻遏而无法利用脯氨酸作为氮源，因此不能生长。抗葡萄糖 阻遏突变株却能够利用脯氨酸而正常生长。;是指培养基中某种基质与微生物接触而增加（诱导）细胞中相应酶的合成速率。; 典型的诱导调节的例子---乳糖操纵子模型，该操纵子由调节基因lacI、操纵基因以及三个结构基因组