色谱文献综述.docVIP

文献综述 引言 高效液相色谱（HPLC）作为分析化学中复杂体系分离分析的重要手段之一，在许多领域都有着广泛的应用。蛋白质组学[1-4]、中药[1-3]、聚合物[4-6]、环境[7]和药物[8]等复杂体系的分离分析为各种色谱技术的发展带来了机遇和挑战。蛋白质组学和中药等研究中样品体系极其复杂，采用传统的一维分离模式所能提供的分辨率和峰容量难以满足高效分离与高灵敏检测的要求[9, 10]。Gidding等[11]指出，当样品中的组份数超过系统峰容量的时，样品在系统中便得不到良好的分离。对于随机分布的样品，完全分离其中98%的组份，系统的峰容量需要是样品中组份数的100倍以上[12]，采用一维液相色谱进行分离时，分离500个峰需200万理论塔板/m（分离度1.5）的柱效[13]。显然，我们不能寄希望于一维色谱分离能力能提高几个数量级[14]，因此，只能采取其他方法，如多维色谱分离系统。 多维色谱技术的历史可以追溯到1944年，Martin和同事利用纸色谱法[15]，在两次分析中，将流动相以直角的方式洗脱样品，第一次实现了二维的高效分离。近年来，色谱工作者把主要的精力放在使用现代柱色谱技术代替薄层技术上。柱色谱技术的优点包括重现性、速度、选择性和易用性，重要的是，柱色谱易于与其他检测技术相连，如质谱。1978年，Erni和Frei[16]设计出了阀切换系统，构建了GPC/RPLC模式的二维色谱。由于采样不足（切阀时间长达75 min），分离度有限，同时没有自动化的阀配置和数据转换过程，没有给出二维色谱图，因此并没有引起重视。1987年，J. W. Jorgenson受J. C. Giddings的启发，开始研究复杂样品分析实用的多维色谱方法。1990年[17]， Bushey和Jorgenson改进了Erni和Frei的装置，构建了IEX/SEC二维系统，通过降低采样时间到6 min，以及协调两维间的流动相梯度和流量，实现了较高的正交性分离，并第一次以3D图的方式展现出来，实现了蛋白质的全二维分析，第一次展现了多维色谱的巨大优势。为了与传统的“中心切割”方法相区别，Jorgenson将他命名为“全二维（comprehensive）”，以表示该方法包括了样品的全部信息[18]。全二维的另外一个进展是与质谱检测联用。Opiteck等在所构建的IEX/RP[19]和SEC/RP[20]系统中，首次将电喷雾质谱和UV与二维系统在线联用进行蛋白质和多肽鉴定。 将NP与RP联用被认为是正交性最好的系统，但由于流动相兼容性不好，一直难以实现。Murphy等[4]首次将正相与反相联用，通过使用水为正相流动相，避开了流动相兼容的难题。Dugo等[21]第一次实现真正意义上的NP/RP分离，通过第一维使用二醇基微柱并且在低流速下运行（20 μL/min），而第二维使用C18整体柱在高流速下运行（4 mL/min），十通阀连接两个定量环，每分钟切割一次，实现了柠檬油的正交性分离。Francois等[22]改进了系统，添加了二维泵、色谱柱和检测器，更重要的是添加了一个十通阀[23]，使得第二维以平行柱模式运行，分析时间2 min，大大降低了第一维流动相对第二维分离的干扰，实现了更高的峰容量。另外一种构建NP/RP二维系统的装置是在接口处将不兼容溶剂蒸发去除。关亚风课题组[3, 24, 25]使用了真空辅助溶剂挥发接口去除馏分中的溶剂；Francois[26]使用超临界流通色谱（SFC），流动相为超临界的二氧化碳，降低压力后直接挥发去除。 Carr课题组提出了以高温色谱和高线性流速进行洗脱以加快第二维的分离速度[7, 27, 28]。以十通阀连接两个定量环，通过将第二维分离温度升高到110 C，第二维梯度洗脱时间仅21 s，二维分离总时间仅需20 min，而峰容量高达1350，相当于一个峰容量单元仅占1 s。全多维液相色谱技术蓬勃发展，2006年以后发表的综述类文献就有43篇[6, 9, 10, 27, 29-68]。多维色谱具有足够高的峰容量和高选择性为解决复杂体系分离问题提供了有效工具，并已在蛋白质组学研究、环境样品的分析、中药研究、生物医药[16]，[17]及烟草分析[18]等方面得到广泛应用。本章将从多维液相色谱理论、二维液相色谱系统、接口技术、联用方式及应用等方面对近年液相色谱的最新进展进行综述。 二维液相色谱的峰容量、正交性和采样频率特征 早在1967年，Giddings[69]就提出了描述等度峰容量的公式。Giddings等指出，在各维色谱分离模式完全不相关的条件下，多维色谱的总分辨率等于各维分辨率平方和的平方根，总的峰容量等于各维峰容量的乘积。与一维色谱相比，多维色谱的分辨率和峰容量有了极大的提高。理论上，多维液相色谱系统可以组合的分离模式的数