新琼寡糖酶法制备和化妆品功效初步评价.pdfVIP

新璩寡糖的酶法常恪和化妆品功效的初步评价 新琼寡糖的酶法制备和化妆品功效的初步评价 捅费 琼胶(agar)是从红藻类海藻中提取出的天然多糖胶体，结构上主要是由(1，3) 一e—D-半乳糖和(1，4)一3，6一内醚一n—L-半乳糖残基反复交替连接的链状聚合 物。琼胶寡糖根据结构的不同可以分为两种，以半乳糖为还原端的新琼寡糖和以 3，6一内醚半乳糖为还原端的琼寡糖。在琼胶寡糖制备方面，酶解法较传统的化学 法具有底物专一性强、产物特异性高，反应条件温和等优点，能够保证酶解产物 结构不被破坏，从而保证寡糖产品的稳定性，使高纯度寡糖的大量制备成为可能。 近年来研究表明，琼寡糖具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性，并且 与寡糖的聚合度(DP)密切相关。然而关于新琼寡糖的活性报道相对较少．日本 Kobayashi等人发现低分子量的中性新琼二糖具有良好的吸湿和美白双重功效， 为开发新琼寡糖在化妆品中的应用提供了有力参考。然而在国内对新琼寡糖的化 妆品功效还未有关注。因此对不同聚合度新琼寡糖的化妆品功效的评价具有重要 的理论意义和实际应用价值。本研究中，通过酶解法制备得到不同聚合度的A、 B系列新琼寡糖，对其在吸湿保湿性和美白两方面的化妆品功效进行了评价，并 初步探讨了聚合度(DP)与活性之间的构效关系． 前期实验中，本室验室已从海洋假别单胞菌CY24中克隆重组得到两个高特 异性的胞外B一琼胶酶AgaA和AgaB。我们首先利用快速蛋白质液相色谱纯化系 统(FPLc)，经过硫酸铵沉淀、疏水层析、凝胶过滤层析三步纯化对两种琼胶酶 AgaA和AgaB进行了纯化，并酶解制备出不同聚合度的新琼寡糖混合物A系列和 B系列。A系列主要为新琼四糖和新琼六糖，极少量新琼二糖，其中四糖占54．65 ％，六糖占41．64％，二糖占3．71％；B系列主要为新琼八糖和新琼十糖，少量 新琼六糖和四糖，其中八糖占41．24％，十糖占30．58％，六糖占13．22％，四 糖占11．96％。 吸湿保湿性实验结果表明，在高、中、低不同湿度环境下，^、B系列新琼寡 糖表现出良好的吸湿性，并且能在短时间内发挥较好的吸湿效果，并且在中、低 湿度环境中，A、B糖吸湿性能更为优越，A糖吸湿性与甘油接近。两者均具有一 定的保湿作用，与甘油和山梨醇接近，但作用并不显著。糖链聚合度的大小与其 新琼寡糖的酶法制备和化妆品功效的初步评价 吸湿保湿功能密切相关，低聚合度寡糖吸湿保湿性优于高聚合度的寡糖。 采用小鼠B一16黑色素瘤细胞作为模型，以曲酸和熊果苷为阳性对照，从对黑 素细胞增殖、细胞内酪氨酸酶以及对黑色素合成的影响三个方面，对A、B系列新 琼寡糖的美白性能进行了初步评价。实验结果表明，A、B糖对B-16黑素细胞具有 低毒性，I岛约为3000ug／mLzh糖对细胞内酪氨酸酶的抑制作用较为平稳，抑制 率大约为20％，与熊果苷接近。高聚合度的B糖对酪氨酸酶抑制作用较不明显。 然而，在低浓度下B糖对黑色素合成的抑制作用高于A糖，与熊果苷接近。结果表 明，A糖的美白作用是通过抑制酪氨酸酶途径来到实现的；虽然B糖对酪氨酸酶抑 制作用较弱，但其还可通过抑制酪氨酸酶以外的其它未知途径达到对黑色素的抑 制作用。 为了找出A组分中对酪氨酸酶起抑制效应的聚合度片段，进一步探讨聚合度 与活性之间的构效关系，我们利用分子筛技术对A系列寡塘进行了分离纯化，得 到了高纯度的新琼二糖、四糖和六糖。对酪氨酸酶活性检测中发现，新琼二糖对 酪氨酸酶几乎无抑制作用，纯新琼四糖和六糖对酪氨酸酶均具有一定的抑制作 用，然而其单独作用的抑制活性反而低于其混合物A糖。构效关系的分析表明， 过高聚合度(新琼八、十糖)或是过低聚合度(新琼二糖)的新琼寡糖对酪氨酸 酶的抑制活性都不明显，只有聚合度比较适中(新琼四糖、六糖)，才具有一定 的酪氨酸酶抑制作用，并且新琼四、六糖的混合物对酪氨酸酶的抑制作用要强于 单独作用的四糖或六糖，推测两者之间通过一定的比例，相互协同，通过多种途 径多环节达到对酪氨酸酶的抑制作用。 综上所述，与阳性对照相比尽管作用不够显著，但A、B系列寡糖兼具有一 定的吸湿保湿和抑制黑色素生成双重功效，低聚合度寡糖作用优于高聚合度寡 糖，并且对细胞无明显的毒副作用，是一种比较难得的化妆品天然原料。这项研 究丰富了新琼寡糖的活性研究，为挖掘新琼寡糖的新用途提供了实验依据，也为 开发寻找新型多效天然的化妆品原料开辟了新途径。 关键词：新琼寡糖；酶法制备；