p21waf1cip1和skp2在涎腺肿瘤中的表达及意义-expression and significance of p21 wa f1 cip 1 and skp2 in salivary gland tumors.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言肿瘤是机体组织细胞在内外致病因素作用下，引起细胞遗传物改变，包括原癌基因激活、突变和（或）抑癌基因失活、丢失等，导致基因表达失常，细胞异常增殖而形成的一种疾病。肿瘤的发病原因和发病机制相当复杂，它的发生发展是一个长时间、多因素共同作用的结果。涎腺肿瘤是人类所有肿瘤中最具异形性的肿瘤。其中发生频率最高的是多形性腺瘤，虽然多形性腺瘤的生物学行为像良性肿瘤一样生长缓慢，但是仍有2%-23%的多形性腺瘤会发展为具有侵袭性的恶性多形性腺瘤[1]。在涎腺恶性肿瘤中，以腺样囊性癌和粘液表皮样癌最为常见。涎腺恶性肿瘤是比较少见的肿瘤，有数据统计分析，在全身所有恶性肿瘤中涎腺恶性肿瘤约占0.3%，而在头颈部恶性肿瘤中所占的比率约为3-5%，且发病率呈上升的趋势[2]。p21Waf1/Cip1基因作为CIP/KIP基因家族中的一员，是细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子（CDKI），通过与周期蛋白(cyclins)和周期蛋白依赖性激酶(CDK)发生作用而对细胞周期起负调控作用，可以使细胞周期发生G1期停滞，从而发挥抑癌功能[3]。p21Waf1/Cip1作为一种抑癌基因，与多种肿瘤的发生发展密切相关。细胞S期激酶相关蛋白2(S-phasekinaseassociatedprotein2，Skp2)作为F-box蛋白家族成员之一,是SCFSKP2复合物的重要组成部分，在泛素蛋白酶体途径中负责对底物蛋白进行特异性识别而介导多种蛋白泛素化降解。Skp2在促进细胞周期G1期向S期的转换以及维持S期进程中起重要作用，它是DNA复制所必需的因子。研究发现，Skp2在人类大多数恶性肿瘤中呈高表达，并与肿瘤的生物学行为一致，说明其有潜在致癌性的可能[4]。对Skp2进行深入的研究，有利于我们对肿瘤的恶性程度及预后进行更好地评估，也为我们探寻药物或基因治疗的新靶点提供了依据。本实验运用免疫组织化学方法检测p21Waf1/Cip1和Skp2在涎腺良恶性肿瘤以及正常涎腺组织中的表达情况，探讨p21Waf1/Cip1和Skp2与涎腺肿瘤临床病理特征之间的关系，以及它们表达之间的相关性。材料和方法1材料1.1一般资料收集华中科技大学同济医学院附属同济医院病理科2005年1月-2009年1月期间口腔颌面外科手术切除的涎腺肿瘤存档标本53例，其中男性32例，女性21例，年龄范围在30-67岁之间，平均年龄46岁。在53例涎腺肿瘤标本中，多形性腺瘤10例，腺淋巴瘤10例，粘液表皮样癌10例，腺样囊性癌8例，腺泡细胞癌6例，基底细胞癌4例，多形性腺癌2例，肌上皮癌2例，鳞状细胞癌1例。其中恶性肿瘤按TNM分期（UICC,2002年）：Ⅰ-Ⅱ期20例，Ⅲ-Ⅳ期13例，术后病理证实有淋巴结转移者20例，未转移13例。以上病例术前均未接受过化疗或放疗。对照组10例正常涎腺组织标本来源其它非肿瘤患者手术标本。1.2试剂与仪器设备所用试剂p21及Skp2单克隆抗体均为鼠抗人单克隆浓缩型抗体,SABC试剂盒，浓缩型免疫组化S-P试剂盒以及DAB显色试剂盒均购于武汉博士德公司。试验所需的石蜡切片机，恒温箱,光学显微镜,加热器等设备及常用仪器和试剂,均由华中科技大学同济医学院附属同济医学院病理教研室提供。2实验方法2.1主要试剂的配制a．0.01M柠檬酸盐缓冲液配制：①储备液的配制：A液（0.1M柠檬酸溶液）：柠檬酸(C6H8O7H2O)21.01g，加蒸馏水至1000ml；B液（0.1M柠檬酸三钠溶液）：柠檬酸三钠(Na3C6H5O7.H2O)29.41g，加蒸馏水至1000ml。②0.01M柠檬酸盐缓冲液：A液9ml，B液41ml，加蒸馏水至500ml，溶液的pH值为6.0。b.PBS的配制（pH=7.4）：KH2PO40.24g，Na2HPO41.44g，NaCl8.00g，KCl0.20g，加蒸馏水至1000ml。c.DAB工作液的配制：一般是现用