茯苓皮中三萜提取、分离纯化及其美白皮肤活性基础性研究.pdfVIP

侠苓皮中三萜的提取、分离和鉴定及其美白皮肤活性基础性研究 摘要 茯苓作为“药食同源”特性的传统中药资源之一，具有显著的生物活性及药理 作用。在茯苓加工过程中，茯苓皮当成废料处理，造成了茯苓资源的极大浪费；为 了提高茯苓加工利用率，提高资源的附加值，进一步探明茯苓中的活性成分，本文 以茯苓皮为研究对象，采用现代分离技术对茯苓皮中的三萜类物质进行了提取、分 离、纯化与鉴定；并且测定了三萜物质提取物抑菌、抗炎、抗氧化及抑制酪氨酸酶 酶活等方面的生物活性。主要研究结果如下： 1茯苓皮三萜提取、含量测定及其定性分析：以湖北大别山区九资河茯苓的皮 为原料，采用香草醛．冰乙酸．高氯酸显色法测定出茯苓皮中总三萜的含量为1．59％。 采用有机溶剂甲醇提取茯苓皮中的三萜，通过单因素试验和四元二次旋转正交试验 确定了最佳提取条件为：提取时间6h，温度为70℃，料液比l：20，提取次数为2 次，且提取率可达到95．2％，而样品纯度可达到78．5％。化学定性反应、紫外扫描 吸收光谱和红外光谱特征吸收表明茯苓皮甲醇提取物中含有三萜类物质。高效液相 色谱与质谱联用推断出茯苓皮三萜粗提物中18种三萜成分。 2茯苓皮三萜的分离、纯化、制备及鉴定：采用硅胶柱层析分离法分离茯苓皮 三萜粗提物得到不同级分的组分，应用化学显色反应、紫外光谱、红外光谱、高效 液相色谱等方法对分离得到的组分进行鉴定。实验结果表明，3种纯化组分虽然各 是几个单一三萜成分的混合物，但较粗提物已具备一定纯度，而且结合紫外光谱、 红外光谱、高效液相色谱等鉴定方法的分析结果可初步推断每种纯化组分中所含的 单一三萜成分。 3茯苓皮三萜的美白皮肤活性：采用生长速率法的抑菌实验表明：茯苓皮中粗 三萜及其纯化组分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌都有较好且较稳定的抑 制作用；小鼠二甲苯耳廓致炎实验表明茯苓皮粗三萜有较好的抗炎活性；体外抗氧 化实验则显示茯苓皮粗三萜及其纯化组分也都有较好的抗氧化活性，其中茯苓粗三 萜及其纯化组分都能有效清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢3种氧自由基， 在红细胞自氧化及H202诱导的氧化溶血体系中，茯苓皮粗三萜及其纯化组分都能对 红细胞溶血起到一定的抑制作用，而在抗小鼠肝脂质过氧化体系中，茯苓皮粗三萜 及其纯化组分对肝脂质自发性过氧化和Fe．H202诱导的过氧化产生的丙二醛(MDA) 都有较好的清除效果；抑制酪氨酸酶酶活实验则显示，茯苓皮粗三萜及其纯化组分 对酪氨酸酶活的抑制属于双向作用，低浓度时有较好的抑酶活性，高浓度时反而对 酪氨酸酶酶促反应有促进作用。 关键词：茯苓皮：三萜；提取；分离纯化；美白皮肤活性 茯苓皮中三萜的提取、分离和鉴定及je美白皮肤活性基础性研究 第一章文献综述 1茯苓及茯苓皮概述 茯苓为多孔菌科真菌Poria 有2000多年的历史。中医理论认为它有利水渗湿、健脾补中、宁心安神之功效，可 治疗小便不利，水肿胀满、痰饮咳嗽、脾虚少食、大便泄泻、心悸失眠和眩晕等病 忠民，1999)，以茯苓为主料的中成药有桂枝茯苓丸、参苓白术丸、五苓散等。食 用茯苓在我国亦历史悠久，如公元前三、四世纪所著《诗经》中就有采集茯苓的记 载。汉朝成书的《神农本草经》将茯苓列为上品。此后，历代本草专著都沿用《神 农本草经》的提法，认为该品“久服，安魂养神，不饥延年”(王克勤等，2002)。 宋代文学家苏氏兄弟中的苏辙著有《服茯苓赋》，苏轼的《东坡杂记》中亦载有服茯 苓法，且苏东坡认为他研制的东坡饼(茯苓为主料，含芝麻及白蜜)食之气力不衰， 百病自去，是长生要诀。清末时因为慈禧太后对茯苓延年益寿，保健养生功效的确 认和喜爱，中国北方许多地区开始盛行以茯苓糕作早点，亦制作出内爽蜜饯、松果 仁馅的茯苓饼，甘香可口富于营养，即使现在也是北京人馈赠老年亲友的名特产。4 深受现代人喜爱的夏季解暑饮品龟苓膏，就是龟板和茯苓熬制而成的，具有明目， 生津，排毒养颜的功效，是美容美肤的辅助食品。因此，从中医理论和保健养生两 方面来看，传统中药茯苓亦是传统的保健延年食品，兼具“药食同源”的特性。 茯苓主产于湖北、安徽、河南、云南、贵州、四川等省，可分为野生茯苓与栽 培茯苓两种(杨树东等，2005)。野生茯苓多寄生于赤松、马尾松、云南松等松属 植物较老的根部，以云南的“云苓”品质为最佳。在温暖地区，如湖北大别山区(主 要是罗田和英山)的茯苓主产区，采用的是春季段木栽培“菌引’’窖苓的方法(王 份接种后的茯