花生体胚诱导再生体系及基因枪转化条件的初步探讨.docVIP

花生体胚诱导再生体系及基因枪转化条件的初步探讨 西北植物,2010,30(10):1966—1970 ActaBOt.Borea1.-Occident.Sin. 文章编号:1000—4025(2010)10—1966—05 花生体胚诱导再生体系及基因 枪转化条件的初步探讨 桂大萍,张月婷,文奇根,晏立英,廖伯寿 (中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学重点开放实验室,湖北武汉430062) 摘要:以花生上胚轴为外植体,研究不同Picloram(毒莠定)浓度处理和不同基因型对体细胞胚胎发生及植株再 生的影响,并利用基因枪将含GUS基因的pCAMBIA2301质粒载体轰击体胚,对基因枪转化条件进行了初步探 索.结果表明:外植体在添加5rag/LPicloram+1mg/LGlutamine(谷氨酰胺)的MB培养基上诱导的体胚发生 率,产胚数及植株再生率最高.不同基因型以中花8号’体胚再生率最高(体胚诱导率为55.36%,植株再生率为 56.79).在氦气压力为1100psi,轰击距离为9cm时,体细胞胚GUS瞬时表达率可达到22.95. 关键词:花生;遗传转化;体胚诱导;基因枪 中图分类号:Q789文献标识码:A PeanutSomaticEmbryogenesisandGeneticTransformation viaMicroprojectileBombardment GUIDa—ping,ZHANGYue—ting,WENQi—gen,YANLi—ying,LIAOBo—shou (OilCropsResearchInstituteoftheChineseAcademyofAgriculturalSciences,KeyLabofOilCropBiologyoftheMinistryof Agriculture,Wuhan430062,China) Abstract:Differentpicloramconcentrationsandgenotypeswereusedtoinducesomaticembryofrommature seedepicotylsofpeanut.SomaticembryosweretransformedwiththeplantexpressionvectorpCAM— BIA2301containinga8一glucuronidase(GUS)geneviamicroproject.1ebombardmentandthetransformation conditionswerestudied.TheresultsdemonstratedthattheoptimalmediumwasMBmediumadding5rag/ Ipicloramand1mg/Lglutamine.inwhichtheratioofsomaticembryogenesis.thenumberofembryosand theratioofplantregenerationwerethehighest;Also,amongdifferentgenotypes,thebestperformancewas with’ZhonghuaNo.8’(theratioofsomaticembryogenesiswas55.36,andtheratioofplantrecovery was56.79).Furthermore,thehighestGUStransientexpression(22.95)wasobtainedwhenparticle bombardmentwascarriedoutunderthe1100psibombardmentpressureand9amdistanceofbombard— ment. Keywords:peanut;genetictransformation;somaticembryogenesis;microprojectilebombardment 在世界范围内广泛栽培的花生兼具油料,食品 和经济作物的用途,但其在栽培生产中易受多种病 虫害以及干旱等不利因素的影响Ⅲ.利用基因工程 技术将外源基因导人花生,获得相应目标性状,已成 为提 花生 条件 高花生抗性和改良品质的有效途径之一.建立 高效再生体系是进行外源基因遗传转化的必要 .体细胞胚胎发生是植物细胞离体再生途径之 国内外已有不少报道通过体细胞胚胎发生途径 收稿日期:2010-0415;修改稿收到日期:201009一】9 基金项目:国家863计划项目(2006AA10A115) 作者简介:桂大萍(1980一),女(汉族),硕士研究生,主要从事花生组织培养和遗传转化研究.E—mail:gui.shirley@yahoo *通讯作者:廖