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分离产蛋白酶的芽孢杆菌菌株的分离方案
分离产蛋白酶的芽孢杆菌菌株的分离方案 芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌，并且广泛存在于土壤中，且其性质稳定，可较容易与其它细菌分离，繁殖速度快，体积较大，在培养时可抑制有害菌生长。而且对人体无害，可代谢生产多种酶和有机酸。 一．筛选模型的选择及原因 二．取样环境及原因 选择一块处于生活区或河道旁污染较少且腐殖质较厚的地块，取表层一下5—10cm处的土样，这样可以保证土壤中含有可以作用于蛋白质的微生物，并且可以避免污染物对菌种活性的影响。 三．筛选流程 将采集的土壤样品用无菌水制备1:10的土壤悬液。 取1:10土壤悬液5mL，注入已灭菌的试管中，将试管放入75—80℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌及其他微生物。 取热处理过的悬液100—200μL，涂布接种到牛肉膏白胨培养基平板，将平板倒置，于30—32℃培养24—48小时。 对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，选出芽孢杆菌菌落。 从芽孢杆菌菌落处分别挑取少许菌苔，接种到含酪蛋白的斜面培养基上，再点接于含酪蛋白的平板，30—32℃培养24—48h，测定平板上菌落苔直径和水解圈的直径。 筛选出水解圈于菌落直径比值大的菌落进行发酵培养，取发酵液进行酶活力测定。再取发酵液酶活力大的菌落进行接种培养。 芽孢杆菌为革兰氏阳性菌，可用革兰氏染色法初步判定，且其在酪蛋白平板上会产生水解圈，并且其菌种有体积较大，表面干燥、粗糙、不透明等特征，较易和其它菌种分辨。还可以利用显微镜观察比较其形态特征来判定是否为芽孢杆菌。 四. 如何检验筛选所得的菌株是所需的目的菌种
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