新血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠主动脉斑块形成及th1th2失衡的影响-effect of xin xue fu zhu yu decoction on aortic plaque formation and th1th2 imbalance in atherosclerotic rats.docxVIP

引言动脉粥样硬化(Atherosclerosis ，AS)作为一种全身性疾病，病理变化主要累及 大、中型动脉，引起心脏、脑组织等重要器官的血液供应，诱发冠状动脉粥样硬化性 心脏病和脑卒中等心脑血管疾病，为我国居民死亡的主要原因之一。近年来较多研究 证实 AS 是机体对动脉内膜损伤做出的炎症—纤维增生性反应，病变形成过程中涉及 多种免疫炎症反应，多种免疫细胞(巨噬细胞、T 细胞)和细胞因子参与了疾病的发生 和发展，其中 CD4+T 细胞在动脉粥样硬化形成过程中起到重要作用。CD4+T 细胞是一 类异源性群体，受抗原刺激后在不同的细胞因子作用下可分化为不同的亚群，包括辅 助性 T 细胞 1（Th1）和辅助性 T 细胞 2（Th2），以及新近发现 Th17 细胞和调节性 T 细胞(Treg)。Th1 细胞介导的免疫反应具有促进 AS 发生和发展的作用，Th2 细胞介导 的免疫反应具有抗 AS 作用【1】。Th1 细胞分泌的 IFN-r 可促进 Th1 细胞的进一步分化， 产生更多的 Th1 细胞，同时还能抑制 Th2 细胞的增殖。相反，Th2 细胞分泌的 IL-4 和 IL—13 可促进 Th2 细胞的分化，同时抑制 Th1 细胞的增殖。正常情况下，Th1/Th2 细胞存在着网络调节，细胞免疫功能趋于动态平衡。已有研究证明 AS 的发生和发展 过程中 Th1/Th2 的功能失衡起着重要的作用。AS 的中医病理机制较为复杂，涉及精、气、血、津液的代谢失常，脏腑功能失 调而形成的瘀血、痰浊等，属于本虚标实之证，本虚以气虚为主，标实则以瘀血内停、 痰浊凝聚为主。痰瘀又可因气的病变互相转化。痰性粘滞，易于阻碍气机，气机不畅， 血液运化失常，停而为瘀，由痰致瘀；瘀血易于阻滞气机，滞涩脉道，气机不利则津 液运化失常，化为痰浊，最终形成痰瘀互结。大量的研究证明活血化瘀法可以通过不 同途径来防治动脉粥样硬化的发生和发展【2-4】。“治未病”的思想来自于《黄帝内经》，内涵主要包括两个方面：未病先防与已 病防变。AS 引起的心脑血管疾病为我国居民死亡的主要原因，但目前对 AS 的防治主 要从合理饮食、适当运动、戒烟、戒酒、降低血糖血脂等方面，所使用药物主要为他 汀类及抗血小板药物，从临床上观察应用以上手段来防治 AS 尚不能达到很好的效果。 目前大量研究证实他汀类药物除降脂外，主要从抑制 AS 形成过程中的免疫炎症来发 挥作用【5】，但此类药物引起的肝肾功能及肌肉等的损害日益受到人民的关注，同时也 限制了此类药物的广泛应用。基于以上原因，我们可以看出中医药在此有较明显的优势，基于此本课题旨在研究新血府逐瘀汤对维生素 D3 腹腔注射联合高脂饲料喂养复制的 AS 大鼠模型主动脉斑 块形成的影响，检测 IFN-r、IL-4 含量及 IFN-r 与 IL-4 的比值反映 Th1 和 Th2 在 AS 大鼠中的失衡表达，并观察新血府逐瘀汤对 Th1/Th2 细胞功能失衡的影响，为临床上 用新血府逐瘀汤防治动脉粥样硬化提供新的证据，并为活血化瘀法防治动脉粥样硬化 提供新的依据。动物实验一、实验材料（一）实验动物SPF 级雄性 wistar 大鼠，体重(200±5)g，购于山东鲁抗医药股份有限公司，动 物合格证号：slxk 鲁符合一级实验动物质量标准。（二）试验用药1.中药：新血府逐瘀汤由生地 9g、桃仁 12g、红花 9g、赤芍 6g、川芎 5g、当归9g、牛膝 9g、枳实 6g、生山楂 6g、泽泻 9g、首乌 9g 组成，上述药物由青岛市海慈 医疗集团药房提供。中药低剂量组生药浓度为 0.6g/ml，中药高剂量生药浓度为 1.2g/ml。按处方比例称取中药材，浸泡 2—3 小时，共煎煮二遍，每遍煮 30 分钟， 分别过滤煎液，合并两次煎液备用(含生药 0.6g/m1)。高剂量组在此基础上稀释一倍。2.西药：注射用维生素 D3（上海通用制药股份有限公司,国药准字 生产批号：101003） 阿托伐他汀钙（立普妥 ）（辉瑞制药有限公司,国 药 准 字 生产批号 013211k）3.大鼠高脂饲料：将 1％胆固醇、0.5％胆酸钠、0.1％甲巯咪唑、5％猪油、93.4％ 为普通饲料搅拌均匀后烘干。（由青岛市海慈医疗集团制剂室制备）（三）主要试剂IL-4 及 IFN-r 试剂盒（美国 RD Systems 公司，进口分装,批号）（四）主要仪器RT-6000 酶标分析仪，深圳雷杜生命科学有限公司；CR-312 高速离心机，法国安莱公司生产；LEICA ASP 300 全自动组织脱水机，德国徕卡公司生产；LEICA EG 1160 石蜡包埋机，德国徕卡公司生产； LEICA RM 2135 轮转切