血管紧张素ⅱ受体拮抗剂对人冠状动脉内皮细胞中nadph氧化酶调节-effect of angiotensin ⅱ receptor antagonist on nadph oxidase in human coronary endothelial cells.docxVIP

英文缩略词表Abbreviation英文缩写英文全称中文全称8-OHDG8-hydroxy-2′-deoxyguanosine8-羟基脱氧鸟苷ACEangiotensin-convertingenzyme血管紧张素转化酶ACEIangiotensin-convertingenzymeinhibitors血管紧张素转化酶抑制剂APammoniumpersulfate过硫酸铵ARBangiotensinreceptorblocker血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂ASatherosclerosis动脉粥样硬化ATangiotensinIIreceptor血管紧张素Ⅱ受体bpbasepair碱基对CCBcalciumchannelblocker钙通道阻滞剂CHDcoronaryheartdisease冠心病DAPI4,6-diamidino-2-phenylindole4,6-二脒基-2-苯基吲哚DMEMDulbeccosModifiedEagleMediumDME培养基DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜DTTDL-Dithiothreitol二硫苏糖醇EDTAethylenediaminetetra-aceticacid乙二胺四乙酸HCAEChumancoronaryarteryendothelialcell人冠状动脉内皮细胞HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶IFimmunofluorescence免疫荧光NADPHNicotinamide-adeninedinucleotidephosphate尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NOXnitrogenoxide氮氧化物ODopticaldensity光密度值OSoxidativestress氧化应激PVDFpolyvinylidenefluoride聚偏二氟乙烯RASrenin-angiotensinsystem肾素血管紧张素系统ROSreactiveoxygenspecie活性氧rpmrotationperminute转/分SDSsodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠SODsuperoxidedismutase超氧化物歧化酶TEMEDN,N,N,N-TetramethylethylenediamineN,N,N,N-四甲基二乙胺TNFtumornecrosisfactor肿瘤坏死因子Tris2-Amino-2-hydroxymethyl-propane-1,3-diol三羟基甲基氨基甲烷TRITCtetrametrylrhodarnineisothiocyante四甲基异硫氰酸罗丹明VCAMvascularcelladhesionmolecule血管细胞粘附分子WBwesternblot蛋白免疫印迹血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对人冠状动脉内皮细胞中NADPH氧化酶的调节中文摘要目的本文旨在研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂在人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)中如何调节尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶。分别利用western-blot和细胞免疫荧光等技术研究了缬沙坦在人冠状动脉内皮细胞中对NADPH氧化酶亚基表达的影响情况。方法实验细胞为常规体外传代培养3-10代的人冠状动脉内皮细胞，分别应用免疫印迹法和细胞免疫荧光法观察和测定gp91Phox的表达和分布，对实验组和对照组的结果进行比较。用70%乙醇擦拭并消毒购置的装有人冠状动脉内皮细胞培养瓶后，放入培养箱培养两小时。待细胞基本贴壁后，吸出原培养液换新培养液继续培养，在显微镜下观察细胞形态符合内皮细胞特征。待细胞长满培养瓶90%时传代培养，并冻存细胞株备用。将细胞分为对照组和实验组。对照组：在不进行任何其它干预的情况下（细胞免疫荧光的细胞皿中需要放入多聚赖氨酸预处理的盖玻片），待细胞基本贴壁（约2-3小时），继续培养24小时后进行相应的处理。即细胞预冷后用化学裂解法和超声破碎法提取未经任何处理细胞膜蛋白和质蛋白，并对提取的蛋白质用BCA试剂盒进行定量分析后为western-blot实验。做细胞免疫荧光的细胞取出盖玻片进行固定、覆抗体、封胶等并保存备用，应用和细胞免疫荧光法测定基础状态下细胞中gp91Phox的水平；实验组：在相同的体外培养条件下，待细胞基本贴壁后（约2-3小时），加入缬沙坦（10μmol/L）继续培养24小时。细胞进行与对照组相同的处理。对两组实验数据的结果进行统计学分析并比较。结果Western-blot结果显示：人冠状动脉内皮细胞gp91Phox主要表达在细胞膜；实验组较对照组细胞膜中的gp91Phox含量下降了32.05%，细胞质中减少了28.28%，均有统计学意义（P＜0.01）；细胞免疫荧光法显示实验组细胞中gp91Phox的荧光度明显比对照组细胞弱，说明实验组