鸭源新城疫油乳剂灭活疫苗制备的分析-preparation of inactivated oil emulsion vaccine against newcastle disease from ducks.docxVIP

中 文 摘 要鸭源新城疫（即鸭源新城疫病毒病）是由新城疫病毒（即鸭源新城疫病毒）引起的 一类急性、高度接触性和致死性的传染病。近年来鸭源新城疫病毒的感染日渐增多,2001 至 2005 年间，张训海(2001)、张存(2002)、陈少莺(2004)、何永强(2005)等学者分别 从安徽、福建、浙江等地不同患病鸭群中都分离到了鸭源新城疫病毒，本病发病率和死 亡率较高，对养鸭业危害严重。疫苗接种是控制该病的有效措施之一，但目前我国尚未有商品化的鸭源新城疫疫苗 供应，故研制鸭源新城疫灭活疫苗对促进和保护养鸭业的健康发展具有重要意义。为此 我们利用分离的鸭源新城疫病毒，研制了鸭源新城疫灭活油乳剂疫苗，并对该疫苗的安 全性、稳定性、免疫效力等进行了研究。本研究分别对鸭源新城疫病毒 SDFCH 株及新城疫病毒 LaSota 株的毒力、增殖特性、 免疫特性及特异性等生物学特性进行了研究。鸭源新城疫病毒 SDFCH 株静脉致病指数为 2.59、对鸡胚的最小致死量的平均死亡时间为 56.6h、对 10 日龄鸡胚的致死率为 10/10、 红细胞凝集价为 1:128、病毒含量为 107.67EID50/0.1mL、免疫原性良好、能够被鸭源新 城疫病毒 SDFCH 株阳性血清中和。新城疫 LaSota 株对鸡脑内致病指数为 0.41、对 10日龄鸡胚的致死率为 8/10、红细胞凝集价为 1:256、病毒含量为 108.0EID/0.lmL、接种502-7 日龄 SPF 雏鸡安全、能够特异性被新城疫阳性血清中和。采用鸭源新城疫病毒 SDFCH 株和新城疫病毒 LaSota 株分别接种 9-12 日龄 SPF 鸡胚，得到病毒含量分别是 107.67EID/0.1mL 和 108.0EID/0.lmL 的两种病毒液。两种病毒液均5050用最终浓度为 0.1%的甲醛溶液灭活。制成 2 批油乳剂灭活疫苗。经过物理性状检验，疫苗均为乳白色油包水剂型；取疫苗样品 10mL 装于离心管中，以 3000r/min 离心 15min， 2 批疫苗样品均不分层；用 lmL 吸管(上口内径 2.7mm，下口内径 1.2mm)，吸取 25℃左 右的疫苗样品 lmL，让其垂直自然流出，记录流出 0.4mL 所需的时间，2 批疫苗样品流 出时间均在 8 秒以内。研制的鸭源新城疫病毒 SDFCH 株灭活疫苗通过颈部皮下或胸部肌肉分别注射 4-5 周 龄 SPF 鸡 10 只及非免疫雏鸭 10 只，每只疫苗 1.0mL，观察 14 日，全部存活，且未出现 因疫苗引起的局部和全身不良反应。分别用病毒含量为 101.0EID50/mL-108.5EID50/mL 的鸭源新城疫病毒 SDFCH 株和新城 疫 F48E10 株病毒液对 26-90 日龄的 SPF 雏鸡及 26-51 日龄的非免疫雏鸭攻毒，观察 14 日，结果显示 SDFCH 株 及 F48E10 株 对 26-90 日 龄 的 SPF 雏 鸡 的 最小致死量为 103.0EID50/mL；SDFCH 株对 26-51 日龄的雏鸭的最小致死量为 108.5EID50/mL。将研制的 鸭源新城疫病毒 SDFCH 株灭活疫苗和新城疫 LaSota 灭活苗通过颈部皮下分别免疫 4-5 周龄 SPF 鸡、非免疫雏鸭各 15 只，接种 21 日后采血，分离血清。免疫鸡、鸭新城疫、 鸭源新城疫病毒 SDFCH 株 HI 抗体效价均高于 1:16，对照鸡、鸭血清 HI 抗体检测为阴性。 当各免疫组 HI 效价达到 24 以上时，在 SDFCH 株攻毒下，鸡和鸭均能获得 100%的保护。 当 HI 效价在 24 以下时，鸭源新城疫灭活疫苗免疫的试验鸭组，对 DPMV（SDFCH 株）和 NDV（F48E10）强毒株的保护率皆为 80%；而用新城疫灭活疫苗免疫的试验鸭组，对 DPMV(SDFCH 株)保护力仅在 67.7%，对 NDV(F48E10 株)保护力为 83.3%。对照组在强毒的 攻毒下则 100%的死亡。研制疫苗的免疫持续期试验和疫苗保存期试验表明，疫苗免疫持续期在 18 周以上，疫苗保存期达到 6 个月以上。 试验结果表明，该疫苗安全可靠，注射后鸭的精神状况良好，饮食、粪便无异常变化，注射部位未见明显变化，疫苗吸收良好。免疫 7d 雏鸭后第 21d 即可产生抗体(平均 为 41og2)，第 60d 可达到 91og2。免疫后第 25d 攻毒保护率可达 90%以上。各项指标均 达到有关质量标准。关键词：鸭；新城疫病毒；油乳剂灭活苗Studies on oil emulsion inactivated vaccine against Duck-origin Newcastle DiseaseAbstractDuck-origin