动物细胞培养技术实验指导全面.doc

实验篇 实验一 实验器材的清?洗 实验物品 （一）每一大组公用?物品（每班分6大组?） 吸球4个、酒精棉球瓶两?个、消毒水一瓶、吸瓶两个、计数板1块、洗液缸一个、95%酒精1瓶。 （二）每一小组公用?物品（两人一小组） 刻度吸管5毫?升4支, 小漏斗1个、 80-200铜滤网?1块、培养皿2个、 l00毫升盐?水瓶 及塞子4个、l0毫升盐水?瓶 及塞子1个、100ml培?养瓶及塞子4?个、10ml培养?瓶及塞子1个?、镊子1个、剪刀1把、冻存管（1.5毫升，2毫升）2个、软毛刷2个、塑料盆一个。 （二）公用物品 小滤器、大滤器2个、1000毫升?量筒2个、100毫升量?筒2个、家用剪刀、耐酸乳胶手套?长的两双、短的四双 、酒精一壶、玻璃棒几个、 0.22μm的小?滤膜一盒、电炉3个。 清洗注意事项?和要求 （一）使用后的实验?器材应立即投?入清水中。带毒的玻璃器?皿需先浸泡在?5％来苏儿或1％盐酸溶液中（依病毒的种类?而定）1天以上或高?压灭菌。 （二）浸泡、煮沸、酸泡的器皿内?要充满液体，不得有气泡。 （三）煮沸前的水面?要高于器材5?厘米，水沸后投入洗?涤剂（直径35厘米?的铝锅，用洗衣粉10?克左右）；若洗涤剂和实?验器材同时从?冷水煮至沸腾?或使用过量洗?剂均易腐蚀玻?璃表面，使玻璃碱化P?H值上升。 （四）软毛刷的刷端?已掉毛的应该?弃去，否则会损害玻?璃。玻璃划痕处易?残留洗涤剂,会改变培养液?PH和毒害细?胞。 （五）浸泡器材的蒸?馏水容器要专?用，并做好标记，如“蒸馏水1盆”、”蒸馏水2盆。 （六）器材清洗干燥?后，在以后各步操?作时，手指不可接触?器材的使用端?。清洗者可戴一?次性薄膜手套?进行操作，这样省时又保?证清洗质量。 （七）清洁物品应及?时包装消毒，应注意妥善保?存，防止落人灰尘?、蟑螂、蚂蚁等引起二?次污染。 （八）刷洗、酸泡后的器材?要用流水振荡?冲洗；不得残留洗涤?剂、清洁液。 操作方法 （一）清洗液（俗称酸液）的配制方法 常用清洁液配?方 重铬酸钾10?0g，浓硫酸200?ml，蒸馏水800?ml。 以配置100?00ml常用?清洁液为例介?绍如下：先在搪瓷盆或?塑料盆中加入?蒸馏水800?0ml，称取1000?g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌?直至溶解（可加热以辅助?溶解），待重铬酸钾液?冷却后，缓慢加入浓硫?酸，边加边用玻璃?棒搅动，以混合液温度?不过快上升和?不出现重铬酸?钾结晶为度。配好后倒入洗?液缸中备用。新配制的清洁?液呈棕红色。当使用时间过?久，清洁液的颜色?变暗、发绿或混浊时?，应弃去（深埋地下），配制新的。配制、盛装清洁液的?容器应防酸、耐热、有较大的开口?，一般用瓷缸、玻璃制品或耐?酸塑料制品。 （二）物品的清洗 1、新购置物品玻?璃器皿清洗步?骤 清水浸泡半小?时以上→简单刷洗→5%的稀盐酸浸泡?过夜→自来水冲洗→在洗涤剂中反?复刷洗→自来水中充分?冲洗→凉干（或50℃烤干）→浸入清洁液中?（俗称浸酸）过夜→流水振荡冲洗?20遍→漓水→去离子水冲洗?3～4次或浸泡2?次（每次24小时?）→三蒸水冲洗两?次（或浸泡一次）→50℃烤干，待包装。 2、用过的玻璃器?皿清洗步骤 带毒玻璃器材?用后应立即浸?入消毒水中，非带毒的玻璃?器材需浸入清?水中浸泡→刷洗→自来水冲洗→凉干（50℃烤干）→浸入清洁液中?（俗称浸酸）过夜→流水振荡冲洗?20遍→漓水→去离子水冲洗?3～4次或浸泡2?次（每次24小时?）→三蒸水冲洗两?次（或浸泡一次）→50℃烤干，待包装。 3、橡皮帽和橡皮?塞的清洗 新购置的橡胶?制品（大小胶塞、橡皮胶头）的洗涤方法如?下； 2%NaOH煮沸?15分钟→流水冲洗→2～5%稀HCl煮沸?15分钟→流水冲洗→去离子水煮沸?20分钟（或去离子水浸?泡过夜）→去离子水冲洗?一次→三蒸水煮沸2?0分钟→三蒸水冲洗一?次→50℃烤干备用． 4、塑料制品（塑料培养板、针头式加压塑?料小滤器）的清洗 用后立即用流?水冲洗→浸于自来水中?过夜→用纱布或棉签?刷洗→流水冲洗→晾干→浸于清洁液中?15分钟→流水冲洗20?遍→去离子水浸洗?三次→双蒸水中浸泡?24小时→晾干备用。注射器薄膜滤?器刷洗前先将?上、下两部分分开?，按上述方法清?洗晾干后将纤?维薄膜滤片夹?在中间（光面向下）拧紧上下两部?分，备用。 5、不锈钢除菌滤?器的清洗 先用洗涤剂刷?洗滤器→流水冲洗15?分钟→去离子水冲洗?2～3次（去离子水浸泡?24小时）→三蒸水冲洗2?～3次或浸泡2?4小时→干燥备用。 6、镊子、剪刀 纱布擦去脏污?→自来水洗净→酒精棉球擦试?。 7、金属滤网 自来水冲洗→蒸馏水冲洗→三蒸水冲洗。 实验二 实验器材的包?装和消毒 实验用品 实验一中清洗?的所有物品