异常黑胆质成熟剂活性组分及其抑制hl-60细胞增殖作用的研究-study on active components of abnormal savda and their effects on inhibiting proliferation of hl - 60 cells.docx

3．体外抗癌活性试验表明，六个 SPE 组分均可抑制 HL-60 细胞的体外生长， 其中 SPE-40 对 HL-60 癌细胞增殖的抑制作用最强。薄层板喷以 NP/PEG 后，SPE-p、 SPE-0、SPE-20、SPE-40 和 SPE-60 均显黄色斑点，SPE-80 无黄色斑点。Extr-4 和 SPE-40 与芦丁在相同位置显相同颜色的斑点。结果还显示，SPE-40 黄色斑点数量明显多于 其余五个组分。4．运用 ASE 技术分别对组成异常黑胆质成熟剂的中各单味药进行提取。结果 表明，九味药的 CH2Cl2 提取物除小茴香外均明显降低 HL-60 癌细胞的存活率。在所 有 MeOH 提取物当中，只有甘草和地锦草等两味药 MeOH 提取物可降低 HL-60 癌细 胞的存活率。各 CH2Cl2 提取物对 HL-60 细胞增殖的抑制作用均明显强于其相对应的 MeOH 提取物。对异常黑胆质成熟剂不同提取物及单味药的 TLC 分析结果表明，牛 舌草、铁线蕨、地锦草和甘草含有酚类化合物，其中甘草尤其其 CH2Cl2 提取物显明 显斑点。Extr-4 与甘草在相同的位置显相同颜色的斑点。SPE-40 薄层色谱中黄酮类 化合物的斑点的颜色和位置与地锦草、铁线蕨、薰衣草相应斑点相同。5．采用高效液相色谱二极管检测技术从异常黑胆质成熟剂中鉴定出 8 种酚类化 合物，即咖啡酸、芦丁、异槲皮苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、芹菜素 7-O-葡萄糖苷、 迷迭香酸、木犀草素和芒柄花素；从 SPE-p 中检出异槲皮苷和迷迭香酸；从 SPE-0 和 SPE-20 两个组分中均检出咖啡酸、异槲皮苷、芹菜素 7-O-葡萄糖苷和迷迭香酸； 从 SPE-40 中检出五种酚类化合物，即芦丁、异槲皮苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、芹 菜素 7-O-葡萄糖苷和迷迭香酸；从 SPE-60 中检出异鼠李素-3-O-芸香糖苷、木犀草 素和芒柄花素等三种酚类化合物。结论：1．对异常黑胆质成熟剂主要化学组分及其含量进行了系统研究，建立了异常黑 胆质成熟剂总酚、总黄酮、总糖和总皂苷含量测定方法，对异常黑胆质成熟剂的物 质组成进行了评价，研究方法及结果为异常黑胆质成熟剂的组分分离和质控方法提 供了基础。研究发现，异常黑胆质成熟剂主要由糖类、皂苷类、酚类（包括黄酮） 和少量生物碱组成，其含量由大到小的顺序依次为总糖、总皂苷、总酚、总生物碱， 其中糖、皂苷和酚三者总重占总提取物重量的 2/3。2．从异常黑胆质成熟剂中提取了四种提取物，即 Extr-1、Extr-2、Extr-3 和 Extr-4。化学组分的定性和定量结果提示提取物 1、3、4 分别为总多糖、总皂苷、总酚提取 物，其制备方法简单，适于工业化生产。体外抗癌活性实验结果表明，四种提取物 中酚类化合物与异常黑胆质成熟剂抑制癌细胞生长的作用之间存在着一定的相关 性，而且 Extr-4（异常黑胆质成熟剂总酚提取物）对 HL-60 癌细胞增殖的抑制作用 明显强于 Extr-1、Extr-2 和 Extr-3。中文摘要3．对总酚提取物进行进一步分离，得六个组分，其中固相萃取小柱以 40%甲醇洗脱而得组分对 HL-60 癌细胞增殖的抑制作用最强，起作用具有时间依赖性。薄层 色谱分析结果提示，该组分含有的黄酮类化合物的数量明显多于其余组分，说明黄 酮类化合物很可能是异常黑胆质成熟剂活性组分或活性组分之一。4．体外抗癌活性实验结果显示，破布木果、地锦草、铁线蕨、甘草、红枣、薰 衣草、牛舌草和蜜蜂花等八味药的 CH2Cl2 提取物和甘草、地锦草两味药的 MeOH 提 取物均能抑制 HL-60 癌细胞的增殖。各 CH2Cl2 提取物对 HL-60 细胞增殖的抑制作用 均明显强于其相对应的 MeOH 提取物，提示弱极性有机组分的体外抗癌活性可能强 于强极性有机组分的体外抗癌活性。研究结果还提示，弱极性有机组分的体外抗癌 活性可能强于强极性有机组分的体外抗癌活性。根据 TLC 分析结果，异常黑胆质成 熟剂活性部位中黄酮类化合物分别来自地锦草、铁线蕨、薰衣草、牛舌草、小茴香 和蜜蜂花中，其酚类化合物至少部分来自甘草。5．高效液相色谱分析结果证实，总酚提取物含咖啡酸、芦丁、异槲皮苷、异鼠 李素-3-O-芸香糖苷、芹菜素 7-O-葡萄糖苷、迷迭香酸、木犀草素和芒柄花素等酚类 化合物，从总酚提取物中分离得到的活性组分 SPE-40 含芦丁、异槲皮苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、芹菜素 7-O-葡萄糖苷和迷迭香酸等酚类化合物。 总之，采用活性跟踪的方法，以异常黑胆质成熟剂为研究对象，以人急性早幼粒白血病细胞株 HL-60 细胞的存活率为指标，并结合主要组分的归属和含量，确定 了异常黑胆质成熟剂的体外抗癌有效部位是总酚。关键词：异常黑胆质成熟剂；总酚；酚类化