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革兰阳性菌分类生物学特性及鉴定 内 容 革兰阳性球菌 革兰阳性杆菌 API鉴定系统 细菌分类工具书 《伯杰氏细菌系统分类学手册》（Bergry’s Manual of Systematic Bacteriology） —细菌分类的标准 Springer-Verlag 公司 2001 年春出版《手册》，第二版五卷本是最新版本 革兰阳性球菌新分类 BXIII门 革兰阳性球菌生物学特性 常见触酶阳性菌属 触酶阳性常见菌属鉴别 葡萄球菌 微球菌 分类 35个种、17个亚种 分为凝固酶阳性和阴性的葡萄球菌 主要鉴定试验 触酶 血浆凝固酶 新生霉素敏感试验 DNA酶 触酶试验（ Catalase ）： 原理：2H2O2 ? O2 + 2H2O 注意事项： 1、细菌、试剂新鲜 2、血琼脂上菌落不宜作此试验 3、阴、阳性对照 凝固酶试验 （Coagulase） DNA酶 原理：DNA酶水解DNA长链，形成数个单核苷酸组成的单核苷酸链。 长链DNA被酸沉淀、 单核苷酸溶于酸 而出现透明环。 操作： 将待测菌点种于DNA琼脂平板上， 35℃培养24-48h， 在细菌生长物上加试剂（菌落浸没） 试剂：1mol/L 盐酸 注意事项： 培养基表面凝固水烤干避免细菌蔓延状生长 葡萄球菌生物学特性 菌落特点： 血平板上 中等大小，光滑，凸起,边缘整齐、 金黄色、黄色或白色，溶血或不溶血的菌落 麦康凯上 红色菌落 CLED上 黄色菌落 中国兰上 不生长 金黄色葡萄球菌 菌落特点： 光滑、完整微隆起、半透明，β-溶血，奶黄色、橙黄色、柠檬色、白色， （ 脂溶性色素） 表皮葡萄球菌 菌落特点： 菌落相对较小，2.5～6.0mm，取决于不同菌株，通常不产生色素，某些菌株产生黏液性常黏附在琼脂表面 腐生葡萄球菌 菌落特点： 菌落5～8mm大小，完整，有光泽，不透明、光滑，比前面提到菌种菌落较凸起，约一半菌株产色素，奶油、黄-橙色。 葡萄球菌生物学特性 镜下特点：G+C、葡萄状排列 鉴定流程 微球菌属 分类 微球菌属共9个菌种 代表菌为藤黄微球菌 微球菌属生物学特性 菌落特点：血平板上小、圆形、凸起、光滑不透明菌落，可产生黄色、粉红色菌落。 镜下：GC+、多为四联、八叠状排列 藤黄微球菌 菌落： BA上菌落小于葡萄球菌，呈圆形、突起、光滑、不透明黄色菌落 镜下：G+球菌体比葡萄球菌大，单个成双，四联八叠排列、包裹状不规则固块 生化反应：触酶+ 氧化酶+ ， 胆汁七叶苷 精氨酸双水解酶 枸橼酸盐 硝酸盐均阴性 粘液口腔球菌 粘液口腔球菌生物学特性 菌落特点：多为粘液状，无色至白色，牢固粘附于琼脂表面 镜下：G+大球菌，成双或成对排列 生化反应：触酶大多阴性，少数弱阳性 ，氧化酶为阴性 、可在含5%NaCl的营养琼脂上生长可形成荚膜 链球菌属 分类 Lancefield血清学分群：A、B、C、D、F、G等18个群 溶血：α、β、γ 生物学特性 菌落特点：灰暗色、扁平、干燥，溶血 或不溶血 镜下形态：G+球菌，单个、成双或短 链排列 链球菌属主要鉴定试验 溶血 杆菌肽试验 CAMP试验 Optochin试验 PYR试验 血清凝集 杆菌肽（Bacitracin）试验 操作：K-B法贴杆菌肽纸片（直径6mm，0.04U/片），常规培养18-24h 结果判读：抑菌圈10mm 敏感。 CAMP试验： 原理：细菌具有“CAMP”因子，能促进葡萄球菌β溶血素的活性，使两种细菌在划线处呈现箭头形透明溶血区。 PYR试验 原理 细菌产生吡咯烷酮酰肽酶（PEP）、水解L-吡咯烷酮β-萘酚酰胺（PYR）基质，释放β-萘酚酰胺与试剂N，N-二甲氨基肉桂醛反应，产生桃红色为阳性。 操作： 将被检菌株接种上述试验平板上，35℃过夜培养后，加入一滴PYR试剂于菌落上，1min后观察结果。 结果判断 菌落出现桃红色为阳性，即水解PYR