自选模块选修生物技术实践要点.doc

第一讲微生物的利用 知识点一　微生物的培养和分离 1．培养基的成分和分类 (1) 微生物的营养：碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。 (2) 培养基的类型： ①按物理性质分：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。 ②按目的用途分：鉴别培养基、选择培养基。 2．灭菌操作 (1)无菌操作的概念： 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。主要包括：各种器皿必须无菌；培养基也必须要无菌；转移菌种时不能带入其他杂菌。 (2)消毒和灭菌的区别： 条件 结果 常用的方法 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 3.培养和纯化大肠杆菌 (1)大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)大肠杆菌培养：LB液体培养基(通用的细菌培养基)——扩大培养；LB固体培养基——分离纯化，鉴定菌种。 (3)大肠杆菌的培养和分离实验步骤： 配制培养基(称量、溶化、调pH)→灭菌→制作平板→扩大培养→划线分离→菌种保存。 (4)分离方法：划线分离法(方法简单)和涂布分离法(单菌落更易分开，但操作复杂)。 知识点二　分离以尿素为氮源的微生物 1．实验目的 (1)使用专一的培养基(含尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。 (2)使用指示剂(酚红)颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的反应。 2．实验原理 由于有些细菌能产生脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生氨使培养基变碱性，于是酚红由黄色变成红色。 (NH2)2C＝O＋H2O2NH3＋CO2 3．实验步骤 制备平板→制备细菌悬液→涂布分离法分离细菌→倒置培养→观察计数。 4．实验结果 (1)与稀释度为10－5相比，培养基中的平均菌落数在10－4处理中多。 (2)在相同稀释度的情况下，尿素培养基中的平均菌落数少于LB培养基中的平均菌落数，其原因是大多数微生物不能利用尿素为氮源。 (3)在尿素培养基上的菌落周围会出现红色的环带。 考点一培养基及微生物的纯化培养技术 1．培养基营养要素 基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。 营养要素 来源 功能 碳源 无机碳源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物 构成细胞中的物质和一些代谢产物；既是碳源又是能源 有机碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等 氮源 无机氮源 无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等 将无机氮合成含氮的代谢产物 有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 生长因子 维生素、氨基酸、碱基 酶和核酸的组成成分；参与代谢过程中的酶促反应 [特别提醒] (1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 (2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。 (3)有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。 2．微生物的纯化培养 方法 划线分离法 涂布分离法 注意事项 (1)接种环的灼烧： 第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物 每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端 划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破 (1)稀释操作时：每支试管及其中的水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处 (2)涂布平板时：涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精 酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体 　　[典例1]　右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是(　　) A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上 C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的 D．第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数 [解析]　在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区