n-连接蛋白质糖基化阐明用微流控芯片平台和方法研究.pdf

摘 要 摘 要 蛋白质糖基化在许多生物和生理过程中发挥着重要的作用，进行蛋白质 糖基化的分析在蛋白质组学以及药物筛选的研究中具有罩要的意义。本论文 分别以寡跨链、糖肽以及整个糖蛋白(糖形)为分析对象，进行以微流控芯 片和质谱或者二者联用为基础的N．连接蛋白质糖基化分析平台和方法的研 究。主要内容包括： 在微流控芯片上实现了简单糖的快速电泳分离和直接、间接激光诱导荧 光检测；发展了以芯片电泳与外切糖萤酶酶解结合，激光诱导荧光检测为基 础，以糖肽为分析对象的糖链结构类型分析方法，对火鸡卵白蛋白的糖链结 构进行推测，结果表明该蛋白含有高甘露糖型和杂合型的糖链；设计并制备 了一种集成化凝集素亲和微流控芯片。在通道内构建以整体材料为载体的微 米级的凝集素亲和柱，以电渗流为驱动力，在微流控芯片上实现了传统凝集 素亲和色谱的全过程，用豌豆凝集素亲和芯片对糖蛋白的糖形进行分析，根 据其糖链与豌豆凝集素结合能力的不同将糖形分为与该凝集素不结合、弱结 合和强结合的组分。该芯片具有耗样量少、分析快速以及操作简单的优点。 构建了联接芯片电泳和质谱的鞘流液辅助的纳米电喷雾接口。用该接口 将芯片电泳与离子阱质谱连接，实现了糖蛋白中糖肽结构的具体分析；建立 了用基质辅助激光解吸．时间飞行-质谱(MALDI．TOF．MS)对从糖蛋白释放 下来的糖链进行结构分析的方法，用该方法进行了不同来源的同种糖蛋白一 鸡卵白蛋白和火鸡卵白蛋白糖链结构的比较分析。 关键词：蛋白质糖基化，芯片电泳。凝集素亲和芯片，质谱 Abstract Abstract Xiuli Mao(Analytical Chemistry) Directed Lin by Prof．Bingcheng all rolein and Glycosylationimportant plays biological processes physiological as such of andvirusinvasion． antigenicity,secretion，cJearance g|ycoproteins Researchin to contributethe of and glyeosylationmay developmentproteomics thesisfocuseson drugscreening．This the ofnew and development methodologies basedonmicrofluidicdevices mass platforms and／or the spectrometry(MS)for analysisofproteinglycosylation． Mono-and