吸光光度法 - 2012中南大学分析化学课件.pptVIP

2）准确度较高，准确度能满足微量组分测定的要求（虽比重量法和滴定法低），比色 RE为5％～10％；分光 RE为2%～5%，若使用精密的分光光度计RE可减至1%～2%。 3）应用广泛：几乎所有无机离子；许多有机化合物；微量，高含量（示差光度法、光度滴定）；研究溶液平衡；测酸碱Ka、Kb、络合物K稳、络合物的组成（络合比）。 4）仪器相对价廉，操作简便，光度分析技术较成熟，历史久，广泛用于工农业生产、医学、临床、生物、环保等各领域。 7.1 吸光光度法的基本原理 一．吸收光谱产生的原理 ●吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱 ●原子吸收光谱是由原子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的，是线状光谱。 ●分子吸收光谱比较复杂，呈带状光谱。如书P313图10－1所示，在同一电子能级中有几个振动能级，而在同一振动能级中又有几个转动能级。 由电子能级跃迁而产生的吸收光谱－紫外、可见吸收光谱； 由分子振动能级和转动能级的跃迁而产生的吸收光谱－红外吸收光谱。各种物质的分子对红外光的选择吸收与分子结构密切相关，所以红外光谱可应用于分子结构的研究。 3. 如测量某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长λ为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，可得到一条曲线，称为吸收曲线或吸收光谱 (P317) 。 3）浓度不同的同一物质，吸收曲线形状相同， λmax不变，只是A随C增大而增大→定量依据 4）吸收光谱是吸光光度法中选择测量波长的依据，无干扰时－选λmax ；有干扰时－干扰较小，A尽可能大。(P323) 分光实验时，盛试液和参比的比色皿（吸收池）采用相同质料和厚度的光学玻璃制成，所以Ir基本不变。 将朗伯定律和比尔定律结合起来，可得朗伯－比尔定律的数学表达式 ： ◆物理意义：当一束平行单色光通过某均匀吸收溶液时，溶液的吸光度与吸光物质的浓度、吸收层厚度成正比。 ◆朗伯－比尔定律不仅适用于可见光，也适用于紫外、红外光区；不仅适用于溶液，也适用于其他均匀、非散射的吸光介质（气体、固体），是各类吸光光度发的定量分析依据（A与C成正比）。 ◆比例常数K取决于吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素，与b、c无关。 ◆A～C呈线性关系－标准曲线、工作曲线 ★ ε表示物质浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时溶液的吸光度。然而实际中不可能直接取c=1mol/L这样高浓度的有色溶液去测ε值，而是由低浓度时（c小时）的吸光度，通过计算求得。(p315) ★ ε越大，表示此显色反应越灵敏，随着近代高灵敏显色反应体系的不断开发，现在通常认为ε≥6×104为灵敏反应；ε≥6×105为高灵敏反应。 ★ 计算ε时，应采用平衡浓度，而实际中以被测物 质总浓度代替，故求得为（表观摩尔吸光系数） ★ε与吸光物质及溶剂的性质、入射光波长有关，同一物质在不同波长处的可能不同，所以表示时，应注明入射光波长。同一物质与不同显色剂反应，生成不同的有色化合物时具有不同的ε值 Cu－DDTC(铜试剂)ε436=1.28×104 L·mol-1·cm-1 　　　 Cu －双硫腙 ε495=1.58×105 L·mol-1·cm-1 ＝0.001，bc＝0.001/ ε （1） 2. 桑德尔（Sandell）灵敏度（又称灵敏度指数） 定义：规定仪器的检测极限为A=0.001时，单位截面积（1cm2）光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量，以ug/cm2表示，S与ε的关系可推导如下： 二、影响准确度的因素 1. 仪器测量误差(P326) 任何光度计均有一定的测量误差，这是因光源不稳定、实验条件偶尔变动、读数不准确等因素造成。 在光度计中，T的刻度是均匀的（等刻度），而A是对数刻度，是不均匀的。对同一台仪器，透光率读数误差△T基本为一定值，在0.2～2％；由于T与C为负对数关系，－lgT＝εbc，因此相同△T引起的△C是不一样的。此范围可通过计算求得： 2. 对朗—比定律的偏离 发生偏离的主要原因有： (1) 非单色光（引起的偏离） 严格说，朗－比定律只适用于单色光，但实际上用各种分光方法所得的入射光实质上都是具有某一波段的复合光，由于物质对不同波长光的吸收程度不同，从而导致对朗－比定律的偏离。 假定入射光由和两种波长光组成，溶液吸光质点对和光的吸收都遵循朗－比定律。 总入射光强为Io1＋Io2，透射光强为I1＋I2 该光通过溶液后的吸光度为： （2）溶液本身化学和物理因素引起的偏离(325) A．按吸收定律假定，所有的吸光质点（分子或离子）的行为必须是相互无关的，而事实证明，这种假设只有在稀溶液（10-2mol/L）才基本成立。c越大，吸光质点相互作用愈厉害，偏离比耳定律的程度愈严重，A~C线发生弯曲，所以