rna干扰技术在生物医药发展的意义与前景_图文.pptVIP

RNA干扰技术在生物医药发展的意义与前景 梅洛(Craig Mello)生于1960年，是被恐龙骨引入科学世界的。梅洛童年时经常跟着父亲在美国西部寻找化石。从那时起，他就迷上了远古时代、地球历史和人类生命的起源等问题。高中时代，梅洛的兴趣逐渐转移到了基因工程方面。 法尔(Andrew Fire)1959年出生在美国加利福尼亚州，本科在加利福尼亚大学伯克利分校主修数学，仅用3年时间就拿到学位。与梅洛类似，他逐渐对涉及生命奥秘的遗传学产生兴趣，并将其作为自己终身的学术追求。 2006年10月2日，瑞典卡罗林斯卡医学院宣布将2006年度诺贝尔生理学奖授予两名美国科学家Craig Mello和Andrew Fire，以表彰他们发现了“RNA（核糖核酸）干扰”机制。 1.RNAi的发现 90年代初，美国和荷兰的两个转基因植物实验组Rich Jorgensen和同事在对矮牵牛(petunias)进行的研究，发现一个奇怪的现象： 共抑制(cosuppression) 　野生型　 　 　　　试验 预测 1995年，康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C.elegans)的par-1基因时，发现了一个意想不到的现象。 利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达，而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA以期观察到基因表达的增强，但得到的结果是二者都同样地切断了par-1基因的表达途径。这是与传统上的解释正好相反。该研究小组一直未能给这个意外以合理解释。 1.RNAi的发现 1998年，fire和mello对以上实验进一步研究： 1.RNAi的发现 正义RNA，反义RNA对unc-22基因的表达 表现轻微的干涉作用，而二者混合物却 引起了高效的沉默作用——基因沉默。 正义RNA、反义RNA、二者混合物 ——C.elegans，以干涉unc-22基因的表达 电泳结果显示上述的正义和反义RNA混合物的主要成分是dsRNA。 进一步研究表明只有与靶基因mRNA有同源序列的dsRNA才具有干涉作用。 由此他们认为，Guo实验中令人意想不到的结果是由于对照组正义RNA中混有少量dsRNA的缘故。 于是，Fire和mello提出在C．elegans体内dsRNA对有其同源序列的mRNA表 达具有高效的干涉作用。并将这一现象称为RNA干扰。 1.RNAi的发现 1.RNAi的发现 在1999年短短的一年间,发现RNA干扰现象广泛存在于从植物、真菌、线虫、昆虫、蛙类、鸟类、大鼠、小鼠、猴一直到人类的几乎所有的真核生物细胞中。2000年，又先后发现小鼠早期胚胎中和大肠杆菌中也存在RNA干扰现象。 推 测RNA干扰是自然界中生物体抵抗外源基因或病毒侵入、 抑制转座子活性，保持基因自稳的一种方式。 2.RNAi的机制 RNAi：RNA interference（RNA干扰）； dsRNA：double-stranded RNA(双链RNA)，包含正义链和反义链； Dicer：RNaseⅢ 家族成员，是dsRNA的特异性核酸内切酶 siRNA：Small interfering RNA (小干扰性RNA)， RNAi的关键效应分子，21-23nt大小的双链RNA； RISC： RNA-induced silencing complex（ RNA诱导沉默复合物），具有核酸内切、外切以及解旋酶活性； RdRP：RNA-dependent RNA polymerases，依赖RNA的RNA聚合酶，是RNAi的调节因子，使RNAi可以在生物体内传递； 2.RNAi的机制 RISC RNAi：是指在进化过程中高度保守的、由dsRNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象，也就是序列特异性的转录后基因沉默。 2.RNAi的机制 2.RNAi的机制 转录水平的基因沉默(Transcriptional Gene Silencing, TGS) 转录后水平的基因沉默(Post-transcriptional Gene Silencing, PTGS) TGS是转基因在细胞核内RNA 合成受到了阻止而导致基因沉默。这种类型的基因沉默，可能是因为基因特异的甲基化而导致； PTGS 则是指基因能够在细胞核里被稳定地转录，但在细胞质里却无相应的mRNA 存在这一现象。 基因沉默 1、siRNA的形成 2.RNAi的机制 siRNAs（21-23nt） long dsRNA Dicer 2、siRNA介导的mRNA 降解 3、RNAi效应的放大 2.RNAi的机制 RISC: RNA-Induced Silencing Complex Exdonuclease Homology search activity Endonuclease Helicase 5’ 3’ 形成