分子生物学复习【PPT】.pptVIP

（三）逆转录1、反转录和反转录酶 逆转录的概念 （RNA DNA） RNA为模板 逆转录酶 4种dNTP 碱基配对的原则 cDNA （互补DNA--不含内含子，只含外显子） 逆转录酶 (RNA依赖的DNA聚合酶) 有三种活性： RNA为模板的DNA聚合酶 RNAase DNA为模板的DNA聚合酶 逆转录过程 催化三种反应： RNA指导的DNA合成 RNA水解 DNA指导的DNA合成 逆转录的意义 RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能 逆转录病毒（RNA病毒） 癌基因：白血病病毒 其他： 艾滋病病毒（HIV）/鸡禽流感病毒 /SARS 基因工程获得目的基因的重要方法之一 七、RNA的生物合成 复制和转录的区别 引物 需要RNA引物 不需要引物 复制和转录的相同点 模板 DNA 原料 核苷三磷酸 碱基配对 碱基配对原则 聚合酶 依赖DNA的聚合酶 合成方向 5’ 3’ 产物 多核苷酸 RNA转录的基本过程 原核生物 真核生物 起始 RNA聚合酶结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，其中的一条链作为转录模板。 酶 RNA聚合酶全酶(?2????) RNA-pol不与DNA分子直接结合 转录因子互相结合生成复合物 RNA聚合酶 结合、转录相应的基因 起始点辨认 ?70 TFⅡD （RNA-polⅡ） 启动序列 -35区的TTGACA -10区的TATAAT -25bp TATA Inr 起始复合物 DNA-RNApol DNA-RNApol-各种TF 原核生物 真核生物 延长 转录-翻译过程偶联 转录、翻译过程分开 转录空泡 RNA-pol （核心酶） ···· DNA ···· RNA 酶 ?亚基脱落 核心酶作用 NTP聚合，RNA链延长 RNA-polⅠ、Ⅱ、Ⅲ作用 原核生物 真核生物 终止 RNA聚合酶在DNA模板上停顿 转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来 依赖Rho(ρ)因子的转录终止 ρ-因子：ATP酶/解旋酶 转录终止的修饰点 AATAAA GTGTGTG 和转录后修饰密切相关 非依赖Rho因子的转录终止 茎环结构3’末端都个连续的U使转录终止 2、RNA聚合酶 原核生物RNA聚合酶 核心酶 α2 β β’ 核心酶参与转录全过程 决定哪些基因被转录 结合底物，形成磷酸二酯键（催化） 结合模板（开链） σ 识别起始点启动子（延长时脱落） ?? ? ? ? ? ?? ? ? ? 真核生物RNA聚合酶 种类 细胞内 定位 转录产物 对鹅膏蕈碱反应 对利福霉素反应 Ⅰ 核仁 45S-rRNA 不敏感 不敏感 Ⅱ 核质 hnRNA，U1-5snRNA 高度敏感 不敏感 Ⅲ 核质 tRNA,5srRNA, U6snRNA,scRNA 中度敏感性 不敏感 线粒体 转录小基因组DNA 活性低 叶绿体 真核生物RNA聚合酶 亚基数目 13-15个 共同亚基 核心亚基 与细菌的核心酶3个亚基有同源性 共同亚基 特异亚基 RNAPⅡ 最大亚基的C端 C端结构域(CTD) RNAPⅡ最大亚基的C端 含有若干七肽重复序列 （Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)n CTD富含Ser/Thr 其磷酸化有利转录和转录后加工 n值具有种属特异性 n26—酵母 n40果蝇 N52哺乳动物 顺式作用元件 启动子 启动子特点 位于转录起始点-200bp RNAP Ⅰ／RNAP Ⅱ--上游 RNAP Ⅲ下游 启动子分类 核心启动子 TATA 盒/起始子Inr 决定转录起始点 启动子近侧序列元件（PSE） 位于核心启动子上游（-200bp以内） GC 盒/CAAT 盒/OCT 与上游因子/可诱导因子结合 决定启动子效率和特异性 增强子 一类能增强真核生物启动子功能的顺式作用元件（DNA序列） 增强子、启动子交错覆盖/连续 没有增强子，启动子不表现活性 没有启动子，增强子无法发挥作用 增强子作用不受序列方向的制约 有组织特异性 可诱导增强子 （反应元件） 一类顺式作用元件 可受某一因素诱导（糖皮质激素） 在多个组织产生反应 举例：激素反应元件（HRE） 转录因子 转录起始必需的 非RNAP的蛋白质 结合于启动子/增强子 往往形成转录因子复合物 通用转录因子 将相应RNAP定位于转录起始点 共同组分：TBP(TATA box结合蛋白) RNAPⅠ SL1 RNAPⅡ TFⅡD RNAPⅢ TFⅢB 转录调节因子结构 DNA结合域 螺旋-转角-螺旋、锌指 亮氨酸拉链、螺旋-环-螺旋 转录激活域 蛋白质-蛋白质结合域 （二聚化结构域） polⅡ TFⅡH T