细胞培养基础与若干注意事项.PDFVIP

细胞培养基础及若干注意事项 Zhijian Liu / 刘志坚, PhD Marketing Specialist Thermofisher Scientific Mobile: Email: zhijian.liu@ 细胞培养基础 •细胞培养定义 通过模拟机体内的生理条件，将从生物机体内取出的器官、组织或细胞等，在体外进行培养， 并使其继续生存、生长和繁殖的过程 •动物细胞培养历史 1907年哈里森（Harrison）采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法培养蛙胚神经组织成功 1923年法国学者卡雷尔（Carrel）成功设计出卡氏培养瓶 1951年，厄尔利（Earle）等人开发了动物细胞体外培养的培养基 1952 年盖伊等于建立了HeLa细胞系（人子宫颈癌细胞系） 30年代滚瓶开始使用，60年代生物反应器/微载体开始使用 •细胞培养的优点 （1）培养对象是活的细胞，并且能够实现较好的均一性和线性放大，适宜于各种规模的研究 （2）培养条件可人为改变，并能得到严格的控制，便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞 生长、发育和分化等的影响 （3）体外培养的细胞可以通过各种技术进行观察、分析，实验结果便于观察、检测和记录 •细胞培养的局限性 细胞体外培养体系与真正的机体内环境并不完全一致，细胞的生物学特性在一定程度上也会 发生改变，因此，体外培养条件下观察到的结果可能并不绝对地符合机体内细胞的真实情况 5 细胞培养基础 •细胞体外培养形式 贴壁生长：大多数哺乳动物细胞属于贴壁依赖性细胞，需要附着于一定的表面才能维持正常的生 命活动 悬浮生长：少数种类细胞，比如血液细胞、某些肿瘤细胞、某些模型细胞可以在悬浮状态生长， 不依赖于特定表面 贴壁细胞 悬浮细胞 需定期传代，但易于通过倒置显微镜观察 较易传代，可将培养物稀释以刺激生长 利用酶或机械方法解离细胞 无需通过酶或机械方法解离 受培养表面积限制，因而产量受限 受细胞浓度限制，易于扩大培养规模 需要使用经过组织培养处理的容器 可使用未经组织培养处理的容器进行培养， 但需要搅动以便进行充分的气体交换 可连续收获产物，用于细胞学研究等多种研 可批量收获产物，用于蛋白质的大量生产及 究领域 多种研究领域 6 细胞培养基础 细胞在体外生长的基本要求 营养支持成分 能量来源：主要是葡萄糖 氧气 氨基酸、维生素、谷氨酰胺等补充营养成分 物理环境 渗透压（280－330mOsm/kg H O） 2 温度（哺乳动物37℃） 酸碱度 (pH7.2-7.4) 7 细胞在体外生长的基本特性 • 自分泌/旁分泌 重组蛋白表达、接种密度、冻存液、无血清培养、流动培养体系 •细胞分裂中的反复贴壁 培养体系、培养表面贴壁性 •细胞与细胞间的直接接触 贴壁生长密度、体外培养细胞功能维持 A B C D E F G H I 8 细胞来源 •从厂商、机构和其他实验室获取 连续传代细胞（如肿瘤细胞、胚胎干细胞等） 有限传代细胞（如原代细胞等） •从固体组织提取 酶解法 （胰酶/EDTA、胶原酶、离散酶、透明质酸酶） 细胞活性易受损，但收获率较高、所需时间短、生长时间较均一 贴壁法 细胞活性好，但收获率低、所需时间长、生长时间不均一