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第四章常用临床生物化学检验技术 临床生化检验教研室 李 艳 常用临床生物化学检验技术 光谱分析技术: 最基本和最常用 电化学分析技术 电泳分析技术 层析和离心分析技术 自动化分析技术 教学目的和要求 掌握：分光光度技术的基本原理及定性和定量方法 自动生化分析仪的工作原理及参数设置 熟悉: 分光光度计的的基本结构 操作方法光源检查和波长校正 离心机相对离心力公式 了解：离心机、自动生化分析仪的类型 原子分光光度计的类型 其他光谱分析技术的基本原理及应用 第一节 光谱分析技术 光谱分析技术指利用物质具有 吸收 光谱特点 发射 对物质进行定性 散射 定量 一、光谱分析分类 发射光谱: 火焰光度法 原子发射光谱法 荧光光谱法； 吸收光谱: 紫外分光光度法 可见光分光光度法 原子吸收分光光度法 红外光谱法； 散射光谱: 比浊法 光波于两个波峰或波谷之间的距离称为波长，其单位用纳米（nm）来表示。1nm=10-9m。 波长 1～1000m 射频区 波长 0.1～100cm 微波 波长 760～1000nm 远红外射线 波长 400～760nm 可见光 波长 200～400nm 紫外光 波长 10～200nm 远紫外光 波长 10-３～10nm x射线 波长 5×10-3～0.14nm γ射线 二、波长与颜色 不同波长光线的颜色 光的波长（nm） 颜 色 光的波长（nm） 颜 色 620 ～ 760 红 色 480 ～ 500 青 色 590 ～ 620 橙 色 430 ～ 480 蓝 色 560 ～ 590 黄 色 400 ～ 430 紫 色 500 ～ 560 绿 色 三、互补色 四、物质颜色与光的关系 溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的质点选择性地吸收某种颜色的光所引起的。 某溶液对各种颜色的透过程度相同，无色透明； 如对各种波长的光完全吸收,呈现黑色 如对各种波长光完全反射,呈灰色 若只让一部分波长的光透过，即溶液呈现是与它吸收的光完全互补的颜色。 硫酸铜溶液因吸收黄色，而呈蓝色；高锰酸钾溶液因吸收绿色，而呈紫色。 光谱分析仪器的基本构造 紫外-可见分光光度计 721分光光度计 第三节计算方法 （一）计算公式 摩尔吸光系数(ε) 根据Lambert-Beer定律，当液层厚度为cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为摩尔吸光系数(ε),是特定波长下的吸光度值。 ε的意义是：ε是物质的特征性常数。在固定条件（入射光波长、温度等）下，特定物质的ε不变，这是分光光度法对物质进行定性的基础。 摩尔消光系数ε方法 2．比较法(对比法) 每次随同测定管制备一个标准管， 用已知浓度的标准液与待测液经相同条件处理，分别测定“标准管（S）”和“待测管（U）”的吸光度As和Au，按下式计算待测物浓度： ⑵使用标准比较法必须遵守的条件 ①必须严格遵守朗伯-比尔定律 即吸光度与浓度成正比 ②每次测定时需要作标准管，二者同时操作所处环境的变化完全相同，误差就可以相互抵消。 ③标准与测定的浓度愈接近，误差就愈小。 ⑶缺点 ①每次需要作标准管，繁琐，浪费试剂。 ②结果需要计算，手续麻烦。 ③标准管与测定管浓度不能相差太大。 2．标准曲线法 根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在