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紫外检测器灵敏度高，精密度及线性范围较好 ，可用于梯度洗脱。 流动相选择有限制。 一些常用溶剂的紫外截止波长 溶剂 CS2 氯仿 四氢呋喃 苯 乙睛 甲醇 水 紫外截止波长 /nm 380 245 212 210 190 205 187 3 荧光检测器 ?灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。 4 示差折光检测器 ?利用组分与流动相的折射率之差进行检测。 ?通用性好，灵敏度较低，不适用于梯度洗脱。 §8-5 HPLC的应用 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50 cm?2.5 mm 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗：2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯 流动相： 干燥正庚烷 1份水饱和的正庚烷 2份干燥正庚烷 水饱和的正庚烷 改变流动相的 组成可改变分离 的选择性 三 离子交换色谱法（IEC） 利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质，通常都可用离子交换色谱法进行分离。它不仅适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子,应用范围较广。 阳离子交换树脂 阳离子交换 阴离子交换 1 分离原理 2 固定相 阳离子： －SO3H(强) －CO2H(弱) 阴离子： －N+R3(强) －NH2 (弱) 基质 合成树脂 纤维素 硅胶 离子交换基团 3 流动相 水相缓冲液+有机改性剂 调节选择性的主要参数 盐种类及浓度 pH值 各种阴离子在阴离子交换剂上的滞留次序： 用柠檬酸离子洗脱比用氟离子洗脱快 离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法。离子交换色谱法在无机离子的分析和应用受到限制。 例如，对于那些不能采用紫外检测器的被测离子，如采用电导检测器，由于被测离子的电导信号被强电解质流动相的高背景电导信号掩没而无法检测。 四 离子色谱(Ion Chromatography，IC) 为了解决这一问题，1975年Small等人提出一种能同时测定多种无机和有机离子的新技术。他们在离子交换分离柱后加一根抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相，从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量。这种色谱技术称为离子色谱。 分离阴离子,选用弱酸的碱金属盐为淋洗液，通过H+?型强酸性阳离子交换树脂填充的抑制柱。 分离阳离子，无机酸（硝酸或盐酸）为淋洗液，通过OH-型强碱性阴离子交换树脂填充的抑制柱。 五 离子对色谱(Ion-Pair Chromatography) 在色谱体系中引入一种与样品溶质离子电荷相反的离子对试剂，通常称为对离子或反离子(counterion)，它与溶质离子形成离子对，从而改变溶质在两相中的分配，使离子性溶质的保留行为和分离选择性发生显著变化。 六 尺寸排阻(凝胶)色谱法 排阻色谱分离示意图 相对分子质量差别 大于10％的化合物 才可以分离 1 分离原理 2 固定相 是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体，其中含有大量液体（一般是水），柔软而富于弹性。 凝胶 （1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构； 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相。 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。 3 流动相 不采用改变流动相组成的 方法控制分离度 毛细管电泳（CE）是80年代初发展起来的，以电场为驱动力、毛细管为分离通道的一种新型分离分析技术。与传统的高效液相色谱技术相比，毛细管电泳具有分离模式多、分离效率高、分析速度快、试剂和样品用量少、成本低等特点，已广泛应用在单细胞、蛋白质、核酸和药物分离分析等方面。 七 毛细管电泳 毛细管区带电泳 由于带电物质淌度存在差异，进而迁移速度不同，从而实现分离。分离依据是在给定pH条件下离子的大小和电荷。 淌度（mobility）是指带电粒子在单位电场下的移动速度。 电泳（electrophoresis）是指在电解质溶液中，带点粒子