Survivin靶向SiRNA重组表达载体的构建和鉴定(期刊)..pdfVIP

山东医药2008年第48卷箍 }4 Survivin靶向SiRNA重组表达载体的 构建和鉴定 蔡 明 ，王国斌h，陶凯雄 ，蔡昌学 (1华中科技大学同济医学院附属协和医院，湖北武汉430022；2华中科技大学同济医学院) [摘要] 目的 构建 Survivin靶向SiRNA重组表达载体。方法 根据 GeneBank数据库提供的Survivin基因 所有变异体的共同核苷酸序列，选择设计3对带发夹状结构的核苷酸序列 ，克隆到空载体 pGensil一1中，转化DI-ISc~ 菌株，提取质粒进行酶切鉴定和测序分析。结果 经酶切鉴定证实Survivin靶向SiRNA重组表达载体测序结果与 设计完全一致。结论 Survivin靶向SiRNA重组表达载体构建成功。 [关键词] 存活素；RNA干扰；基因治疗 [中图分类号] R86 [文献标识码] A [文章编号] 1002-266X(2008)34-0034-03 C0nstructionandidentificationofSiRNA recombinantexpressionvector targetingsurvivingene Cai ，WangGuo—bin，TaoKai-xoing，CaiChang-xue (1UnionHospital，Tong／iMedicalCollege，HuazhongUnive=ityof ScienceandTechnology，Wuhan430022，P．R．China) Abstract：0bjective ToconstructSiRNArecombinantexpressionvectortargetingsurvivingene．Methods Ge· nomesequencesofsurvivingenewasretrievedfromgenebank，threepairsofoligonucleotidesweresynthesizedandinserted intoplasmidpGensil一1，DHSctstrainsweretrnasformed，plasmaWas exrtactednadidentifiedbyrestrictionendonuclease nadsequencenaalysis．Results ItWas confirmedbyrestrictionendonucleasethatSiRNA recombinantexpressionvector targetingsurvivingenewascoincidedwithhtedesignscompletely．Conclusions TheSiRNA recomb innatexpressionvector targetingsurvivin genehasbeenconstructedsuccessfully． Keywords：survivin；RNA interference；genetherapy Survivin是凋亡抑制蛋 白家族 (IAPs)的重要成 NM_oo1012270，NM_001012271)，依照shRNA设计 员，独立于 B型淋巴瘤细胞因子2(Bcl-2)家族，是 的原则选择3对长度分别为19个碱基的靶序列，寡 迄今发现作用最强的凋亡抑制因子。2007年 3月 核苷酸序列如下，Survivinl—A：5一GATCCAGCAT— ～ 2008年 3月，本研究拟用基因克隆技术构建Sur— TCGTCCGGTrGCGCTTCAAGACGGCGCAACCCGAC vivin靶向的小干扰RNA(SiRNA)重组表达载体，探 GAATGCTI] TITGA L1TCA_3 ．Survivinl—B：5一AGC 讨用 RNA干扰方法干扰肿瘤细胞 中Survivin基因 TrGAATrCAAAAAAAGCAITCGTCCGGTTGCGCCGT 的表达，从而为肿瘤的基因治疗提供理论依据。 CITGAAGCGCAACCGGACGAATGCTG一