Ⅱ型胶原酶在软骨链蛋白纯化、分离中的效果观察(期刊)..pdfVIP

II型胶原酶在软骨链蛋白纯化、分离中的效果观察 廖永华 广州医学院实验核医学教研室 广东广州 510182 摘 要 目的 探讨在软骨链蛋白(CLP)的分离、纯化实验 中，采用II型胶原酶 (cII)消化胶原蛋白，提高 CLP的回收率。方法 ①sepharose4B的活化与AH连接；②HA与AH-Sepharose 4B连接；③按 1：2：3 的cII比例浓度消化胶原蛋白；④亲和层析。结果 亲和层析淋洗前后各样品的吸光度 (A)分别为s0：Sl： s2：s3=0．44：0．39：0．35：0．31和s0：s1：s2：s3=0．72：0．84：0．92：0．99；亲和层析淋洗曲线峰的高度 (H)mAu值：s0s1s2s3，淋洗曲线峰出现的时间(T)：s0s1s2s3。结论 cII有助于改善 CLP粗提取液的粘度，提高CLP的回收率。 关键词 II型胶原酶 软骨链蛋白 透明质酸 亲和层析 The effect of purification and separation of cartiIage Iink protein with OoIlagenase TypeII LIAO Yong—hua Guangzhou MedicalCollege，Guangzhou 510182 Guangdong China Abstract ObjectiveTo investigate theexperimentwhichcartilage linkprotein (CLP)was purifiedand separatedbyCollagenaseTypeII(CII)wasabletoraisetherecoveryofCLP． Methods①Sepharose4BactivationandAH connection；②TheconnectionofHAandAH—Sepharose 4B：③CIIreactedtothecol1ogen inproportionof 1：2：3ofconcentration：④Affinity chromatography．ResultsTheabsorbance (A)beforeandafter thechromatographyareSO：S1： S2：S3：0．44 ：0．39：0．35：0．31 and SO：S1：S2：S3=0．72：0．84：0．92：0．99 respectively．For the affinitychromatography，thedripwashingpeakhigh (H)mAuvaluerepresentsSOSlS2S3； andthedripwashingpeakappearstime (T)showsSOSlS2S3．ConclusionCIIraisesthe recoveryeffectivelyasitconducestoimprove(in／decrease)theviSCOSityofroughextract． Keywords CollagenaseTypeIICartilage 1inkprotein Hyaluricacid Affinity chromatography 中图分类号：R329．2 文献标识码：A 文章编号：1007—1245(2008)23-0008—03 透明质酸 (HA)是一种线性大分子黏多糖，存在于 面临一个重要问题就是CLP的粗提取液，胶原蛋白较 动物的各种组织细胞问质中，该物质在 1934年首次 多、粘度大，影响高速离心的效果和亲和层析时的蛋 从牛眼玻璃体中分离出来_1_。CLP是哺乳动物体内与HA 白质回收率。胶原酶能在生理PH和温度条件下特异性 相结合的一种大分子蛋白质，CLP的功能是将HA与蛋 地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它 白聚糖单体连接成蛋白聚糖复合体，CLP大量存在于软 蛋白质和组织，也有文献报道_3]：肝脏中间质胶原酶 骨组织中，对维持软骨组织的生物学功能，调节软骨 可降解纤维胶原蛋白，防止胶原蛋白进一步沉积。本 细胞的增殖与分化等方面具有重要意义。分离和提取 实验试图从消化CLP粗提取液中的胶原蛋白方面着手， CLP对研究软骨组织病变、地方病、肿瘤等有重要临 以不同CII的浓度，处理CLP粗提取液，然后再作亲 床价值。II型胶原蛋白是软骨基质的主要有机成分， 和层析、分光光度计测量，观察实验效果，现报告如 属于原纤维胶原蛋白E2]。在CLP的纯化