但对于进展期大肠癌患者 - 中国临床康复中国组织工程研究与临床康复.pptVIP

逯晓波 中国医科大学公共卫生学院 材料与方法 细胞系 中国仓鼠卵巢细胞系（CHO）: AA8（CHO野生型） UV20（CHO 突变型，ERCC1表达缺失） DMEM培养基， 37℃,5% CO2培养箱中培养备用。 方法: 构建两种包含ERCC1 codon 118 SNP 的基因型T/T或C/C的质粒 总RNA提取及 cDNA合成 PSQTM DNA短序列分析ERCC1SNP基因型 ERCC1基因扩增及目的片段的回收 Gateway?定向克隆技术构建ERCC1表达载体 2、不同ERCC1 SNP的表达载体转染UV20细胞 转染细胞可在含10% G418 的DMEM培养基选择 生长，次日调G418 浓度为5%，五日后，在荧光 显微镜下根据是否可见表达绿色荧光蛋白细胞， 确定是否转染成功及转染效率。 每次转染实验设立无DNA的空白对照组，以保 证实验结果的特异性 3 、蛋白提取及Westernblot检测ERCC1表达 获得3种稳定转染细胞系UV20-ERCC1(C/C)或 UV20-ERCC1(T/T)及UV20-GFP,聚丙稀凝胶电 泳法定性检测ERCC1蛋白表达 4 、 检测各转染细胞E