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过度运动导致大鼠肾组织TGF-β1变化研究 　　作者简介：姚俊(1970-)，男，湖南人，本科，助理研究员，研究方向运动生理、生化。 　　摘要：通过在不同负荷的运动训练状态下，观察大鼠血清BUN、Ser、尿蛋白排泄率以及肾组织TGF-β1表达的变化，研究不同负荷的运动训练对大鼠肾组织结构、功能及肾组织TGF-β1表达的影响，以及揭示肾组织TGF-p1的表达对肾脏组织结构、功能变化及运动性蛋白尿产生的作用及机制。实验结果表明：综过8周过度训练后，大鼠血清BUN、Ser及尿TP排泄率显著升高(p＜0．05)，肾组织TGF-β1表达明显增加，表明过度训练造成肾小球及肾小管超微结构的伤害，随着ECM过度堆积，发生肾间质纤维化，加剧肾单位的损害，导致肾小球滤过和肾小管重吸收功能的下降；提示过度训练导致肾组织TGF-β1表达的显著增加，是过度训练造成肾组织超微结构及功能损害的重要因素。 　　关键词：血清BUN；Scr；尿TP；TGF-β1；过度训练 　　中图分类号：G804．23　文献标识码：A　文章编号：1007-3612(2006)05-0629-03 　　本文通过在不同负荷的运动训练状态下，观察大鼠血清BUN、Set、尿蛋白排泄率以及肾组织TGF-β1表达的变化，研究不同负荷的运动训练对大鼠肾组织结构、功能及肾组织TGF-β1表达的影响，以及揭示肾组织TGF-β1的表达对肾脏组织结构、功能变化及运动性蛋白尿产生的作用及机制。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1　实验动物与喂养　选用健康雄性Wistar大鼠36只，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物级别：二级，体重192～271g，鼠龄3～4个月，常规分笼喂养，自由饮水进食。动物室内温度21～24℃，相对湿度45％～60％，每天光照时约为7：00～19：00。 　　 　　1．2　实验方法 　　1．2．1　运动条件　玻璃钢游泳地呈圆形，内壁光滑，直径45em，水深70em，超过大鼠身长的2倍，水温34～36℃。 　　1．2．2　分组与训练方案　大鼠购进后，先适应性喂养1周，然后按体重分层，随机分为3组：1)对照组(A组)14只，常规喂养，不加干预，平时不运动。2)一般游泳训练组(B组)14只，每周训练6 d，每天游泳训练1次。第1次下水游泳20min，此后逐日累加，至第1周末时游泳时间延长至每天1h，第2周末时每天游1．5h，此后维持这一运动量直至完成8周的游泳训练。3)过度训练组(C组)25只。前2周训练安排同B组，第3周末游泳时间增长到2h，第4周开始进行力竭性游泳训练；开始时大鼠尾部负重0．5％体重的重物，每天游2h，至周末增加到负体重1％的重量，第5周末增加到2％。从第6周起每至第8周训练结束，大鼠上、下午各训练1次，负3％体重的重物游泳2h，对在短时间内力竭的大鼠(沉入水底10s不能回到水面)，捞出休息5 min，然后继续再进行游泳训练，使训练时间至满2h。 　　1．3　取材制备与处理　各运动组大训练满8周后，次日上午继续按第8周安排的训练方案训练。B组游完1．5 h，C组大鼠负3％体重游完2h或游至力竭。A组和B、C组大鼠在完成游泳训练后即刻经腹腔注射2％戊巴比一生理盐水(5mL/ksBW)麻醉后，腹腔主动脉取全血2 mL置于玻璃试管中，并立即低温离心分离血清(4℃，300 rpm，10 min)，用于测定BUN、Scr。迅速打开腹腔，用4号针头和干燥针筒抽尽膀胱尿液，所取尿样精确定容后，装入试管-20t冰箱保存，用于尿蛋白含量测定。同时取右肾，经0℃生理盐水充分冲洗后称重，置于液氧中保存。以备肾脏组织TGF-β1表达的测定。取左肾4％戊二醛固定待作超微结构分析。 　　1．4　观察指标及方法　1)血清BUN、Scr的测定在日立7179A全自动生化分析仪上完成。 　　2)TP测定采用Perini测定法。排泄率采用ug／min表示[3]。 　　3)肾脏组织TGF-2表达的测定采用Western blot方法。肾组织总蛋白的提取采用RNA细胞裂解液，蛋白含量按改良Lowry法测定。取总蛋白50ug经15％SDS凝胶电泳后，转移至硝酸纤维素膜上，用丽春红染色观察转移效果并标出分子量标准。然后用含5％脱脂牛奶的TBST 4℃封闭过夜，洗膜后加入兔抗TGF-2多克隆抗体(1：100)进行杂交，再用HRP标记的羊抗兔IsC(1：200)进行二抗杂交，最后加入免疫印迹化学发光试剂(购自华美生物工程公司)显影。杂交结果在LeicaQSOOIW图像分析系统中进行吸光度分析。 　　肾组织超微结构检查：用日本产JEM-1200EX透射电镜观察超薄切片(×8000倍)肾小球基底膜的厚度，每张电镜切片随机选择8个包含肾小球基底膜的视野，观察基底膜厚度、系