毛细管电泳-安培检测联用技术的方法和应用研讨.pdfVIP

摘要 毛细管电泳(CE)和高效液相色谱(HPLC)是二十世纪八十年代以来发展最为 迅速的液相分离分析技术。由于二者在对复杂体系极强的分离分析能力，在药物 分析、生化分析、食品分析、环境分析等几乎所有的分析化学领域得到广泛应用。 与HPLC相比，CE具有高达百万(理论板／m)的分离柱效、纳升级的进样量和 快速的分离特点，在分离效率和分析成本上具有明显优势。然而，由于其极小的 进样量，当与常规的紫外检测联用时，导致浓度检测灵敏度较低，不能满足有些 痕量分析的要求；用激光诱导荧光检测必须进行衍生化，而衍生试剂种类有限， 且存在衍生反应不充分和试剂干扰等问题；质谱检测由于存在较大的背景噪音还 停留在实验室阶段。电化学检测中的安培检测技术，能对于自然界广泛存在的糖 类、氨基酸、肽等物质产生直接的电化学响应；基于柱端检测的毛细管电泳一安 培检测具有相对高的灵敏度，且线性范围宽、仪器简单、分析费用低的特点。目 前，开发有更高灵敏度的修饰电极、可进行多指标同时测定的复合电极、对毛细 管电泳一电化学检测(CZE—AD)的新缓冲体系的研究、接口研究等均是本学科的 研究热点。 高效液相色谱是目前成熟和稳定的分离分析技术，其中反相色谱一紫外检测由 于其对生理活性分析物的普适性在生化分析中广泛应用。但是，紫外检测选择性 差且生化样品组成复杂，如何选择适当的前处理技术使HPLC—UV检测干扰最小是 令人关注的研究内容。 本论文包括六章： 第一章为绪论，简要地综述了毛细管电泳的发展历史、基本原理、分离模式、 联用检测技术，应用领域研究进展以及本论文研究的目的意义。 备了一种新型的复合电极。该电极通过与羧基化石墨粉组成的复合电极进行对比 试验，说明MwCNT—CooH对多酚存在电催化效应；对复合电极填充物进行形貌表 征和电化学性质的研究：对Cu：O与MwCNT—C00H组成比例进行了优化。实验表明， 流放大效应。该复合电极被应用于毛细管电泳一电化学检测中对糖和多酚进行测 定。在优化分离条件下，绿原酸，芸香苷，蔗糖，葡萄糖，甘露糖和果糖能在 100 nlnlol·L．1 mol‘L-1、糖在5×lO呻～1×10-3 mol·L．’范围内呈现良好的线性，多酚和糖的检 化能力、对分析物的结果重现性较好。用该方法对市售的两个烟草产品中的多酚 和糖进行了测定，结果满意。 第三章研究了一种在CZE—AD中运用不同的缓冲溶液于分离、检测部分以实现 对乌龙茶中糖、氨基酸和表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCg)进行同时测定的 Ilunol·Ld 方法。该方法为以柱端射壁检测方式作为CZE—AD接口，检测池中用100 u NaoH溶液使一根直径300m的铜圆盘(工作电极)表面对分析物形成电催化氧 化；分离毛细管中，由30I姗ol·L．1硼酸盐和40mmol·L’1磷酸盐组成混合运行 缓冲液，通过配位作用使分析物荷电后向检测端移动。在优化的电泳条件下，所 有分析物能在35min内完成分离；方法有较低的检测限和相对标准偏差，在三 个数量级范围内峰面积和分析物浓度间存在着良好的线性关系。最后，对乌龙茶 汤实际样品进行了分析，结果满意。 第四章针对用不同方法所做的芦笋多糖组成分析结果不同的问题，采用毛细 管电泳一安培检测对芦笋多糖中的单糖组成进行测定。对“柱端射壁’’检测模式 中，铜电极直径变化对与毛细管接口的影响进行了详细对比研究。对实验中缓冲 浓度，分离电压、进样时间对分离的影响进行研究。在优化条件下，7个单糖在 120nun01·Ld Na0H被基线分离。灵敏度低、重现性良好。实验发现，芦笋多糖 由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖组成，其摩尔比为17．8：5．5：1．0： 14．2：17．2。相对于其他分析方法，采用毛细管电泳一安培检测方法进行芦笋多 糖的组成分析具有快速、精确和进样量较低的优点。最后，对实验结果的差异进 行了讨论。 第五章利用CZE—AD对脑血栓片的四种活性成分阿魏酸、原儿茶醛、咖啡酸和 原儿茶酸进行了测定。分别研究了工作电极电位、运行缓冲液的pH值和浓度、 分离电压和进样时间等参数对实验结果的影响。最佳实验条件为：20mmol·Ld硼