用于内毒素去除的新型亲和吸附剂的制备及功能研究.pdf

摘 要 随着生物制药和生物医学工程相关领域的发展，人们对产品中可能存在的微 量有害物质的清除越来越重视。内毒素(ET)是一种在自然界广泛存在的污染物， 是一种毒性很强的致炎和热原物质。有效清除制品中、特别是生物制品中污染的 内毒素一直是医学、制药、生物工程等领域研究的热点。由于内毒素的相对分子 质量较大，与大分子生物制品在同一数量级，因此从这类制品中去除微量的内毒 素难度很大。迄今为止，在实际生产过程中得到应用的材料和方法并不多。一些 已经商品化的产品也存在吸附效率低，价格高等问题。因此，对这一领域的研究 仍具有十分重要的价值和实际意义。本课题针对当前内毒素亲和吸附剂存在的问 题，从载体、配基两方面着手，结合反应条件的研究，发展了几种新型的适于用 作ET吸附的活性配基物质，制备出了对内毒素吸附量高、特异性好、血液相容 性好的新型吸附材料。通过对这些材料的吸附特性的研究，为内毒素亲和吸附剂 的进一步结构设计和制备提供依据。 在载体材料的研究方面，论文主要研究了作为活性吸附剂载体的多孔硅胶的 孔径和比表面等参数对亲和吸附剂制备的影响。以多孔硅胶为载体的亲和吸附剂 是采用表面接枝的方法制备的。选用组氨酸(His)为活性配基。经酸化处理的多孔 硅胶先以硅烷偶联剂KH550硅烷化，在硅胶表面引入活性胺基，然后以戊二醛 为间隔臂将组氨酸接枝在多孔硅胶载体上，制成用于内毒素去除的亲和吸附剂。 用IR，TGA、元素分析和功能基化学滴定的方法测定了每步反应的转化率，即 不同反应物在多孔硅胶上的接枝率。结果表明，反应物在硅胶上的含量与硅胶的 比表面积及孔径有关，且多步反应使硅胶载体的孔径不断减小。由于ET的分子 尺寸较大，因此，选用较大孔径的多孔硅胶基质制成的亲和吸附剂对ET的吸附 效果较好。这样才能使ET分子扩散到硅胶孔内被接枝在孔壁上的活性配基吸附。 在配基的研究方面，本论文研究了三种不同的配基：一种是文献上已有大量 报道的组氨酸配基，一种是根据组氨酸中咪唑基对ET的特殊亲和作用而选则的 乙烯基咪唑配基(VI)，最后一种是在实验过程中发现的含环氧基的亲和配基。 前两种配基中的主要活性位均是咪唑基团，但组氨酸分子中还含有负电性的羧基 和具反应活性的胺基。乙烯基咪唑是通过自由基聚合反应接枝到硅胶载体上的， 得到的是一种大分子配基。通过上述两种吸附剂对水溶液中ET的静态和动态吸 附性能进行比较，发现以聚乙烯咪唑为配基的吸附剂对ET有更高的吸附容量和 去除率。这不仅证明了咪唑基作为活性功能基对ET有很高的选择吸附性，而且 也证明，配基与ET之间的静电相互作用是使其具有较好吸附特性的主要原因。 当配基分子中含有羧基等负电性基团时，会削弱咪唑基对ET的吸附作用。含环 氧基的化合物作为ET的亲和配基至今未见文献报道。这种含环氧基的配基可以 通过与相应的硅烷偶联剂反应引入吸附剂表面，或是通过在含端烯基的载体上接 枝甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)而固载到载体上。研究表明，一旦环氧基被 打开，相应的吸附剂对ET就不再呈示吸附能力，说明环氧基团是对ET起选择 吸附作用的活性位。有关该配基与ET作用的机理还有待于进一步的深入研究。 但这一发现拓宽了活性配基选择的范围。 聚乙烯基咪唑作为大分子配基用于ET的吸咐虽然有很高的选择性和吸附容 量，但VI较强的分子间作用力及咪唑基过高的接枝密度会显著影响该配基的吸 附效率。论文通过VI与甲基丙烯酸酯的共聚较好地调节了咪唑基在接枝链上的 分布。由于VI与甲基丙烯酸酯在溶液中发生共聚反应的竞聚率有很大差别，属 r11，r2l的非恒比共聚反应。所以在共聚时，乙烯基咪唑自聚的能力会很差。 因此，在与甲基丙烯酸酯单体形成的共聚链中绝大多数乙烯基咪唑单元会被若干 个丙烯酯单元隔开成单个分布。可以认为，对ET基本无吸附效果的丙烯酸酯在 共聚体中发挥了间隔臂的作用，使单位咪唑基对ET的吸附量得到提高。论文通 过共聚接枝的方法还有反相悬浮聚合的方法制备了一系列VI与第二单体的共聚， 粒子，并测定了不同单体配比下得到的共聚接枝物对ET的吸附性能。 在合成路线方面，除了KH550方法外，论文还研究了用环氧法引入组氨酸 配基的方法。首先用含环氧基的偶联剂KH560对硅胶载体进行硅烷化处理，引 入环氧基，然后利用环氧基与组氨酸分子上的氨基直接开环加成，或利用将环氧 基氧化形成的醛基为中介进行加成，使组氨酸配基结合在硅胶载体上。结果表明， 直接开环加成制成的吸附剂对ET有更高的吸附容量。 论文对吸附剂的各种制备方