天然产物分离及分析PPT.ppt

热效应 超声波在介质中的传播过程也是一个能量的传播和扩散过程，即超声波在介质的传播过程中，其声能可以不断被介质的质点吸收，介质将所吸收能量的全部或大部分转变成热能，从而导致介质本身和药材组织温度的升高，增大了药物有效成分的溶解度，加快了有效成分的溶解速度。 由于这种吸收声能引起的药物组织内部温度的升高是瞬时的，因此可以使被提取的成分的结构和生物活性保持不变。 超声波提取的特点 超声波提取时不需加热，避免了中药常规煎煮法＼回流法长时间加热对有效成分的不良影响，适用于对热敏物质的提取；同时由于其不需加热，因而也节省了能源。 超声波提取提高了药物有效成分的提取率，节省了原料药材，有利于中药资源的充分利用，提高了经济效益。 溶剂用量少，节约溶剂。 超声波提取是一个物理过程，整个浸提过程中无化学反应发生，不影响大多数药物有效成分的生理活性。 提取物有效成分含量高，有利于进一步精制。 影响超声波提取的因素 时间：超声波提取通常比常规提取的时间短。超声波提取的时间一般在10-100min以内即可得到较好的提取效果。 超声波频率：超声波频率是影响有效成分提取率的主要因素之一。 温度：随着温度的升高得率增大，达60℃后，温度如继续升高，得率则呈下降趋势。 过滤 影响因素： 液体黏度越大，滤速越慢；黏度随温度升高而下降，故升温可剐口滤速。 滤材的毛细管越长，管径愈小或数目愈少，则滤速愈慢。 压力愈大，滤速愈快；滤渣层越厚，滤速愈慢。 沉淀中有胶状物或其他可压缩的物质，易堵塞滤孔，使滤速大大减慢。 过滤设备 (1) 加压叶滤机 真空过滤机 沉淀法 盐析沉淀法 有机溶剂沉淀法 铅盐沉淀法 酸碱沉淀法 盐析沉淀法 溶质：在溶液中加入中性盐而沉淀析出。不同物质在高浓度的盐溶液中溶解度不同来达到分离、提纯的目的。 盐析作用的主要原因是由于大量盐的溶入，使高分子物质失去水化层，分子之间相互聚集而沉淀。在生化产品生产中，许多物质都可以用盐析法进行分离沉淀，如蛋白质、多肤、多糖、核酸等。 盐析法具有下列优点：成本低，不需特别昂贵的设备；操作简便、安全；对许多生物活性物质具有稳定作用。在生化制备技术高度发展的今天，它与其他方法交替使用，仍是一种十分常用的纯化手段。 影响盐析的因素 离子强度：离子强度越大，蛋白质的溶解度越小。 蛋白质的性质：蛋白质的结构和性质不同，盐析沉淀要求的离子强度也不同。例如血浆中的蛋白质，纤维蛋白原最易析出，硫酸按的饱和度达20%即可；饱和度增加至28-33%时，球蛋白优先析出；饱和度再增加至33-50%时，拟球蛋白析出；饱和度大于50%时，白蛋白析出。 pH：溶液的pH 距蛋白质的等电点越近，蛋白质沉淀析出所需的盐浓度越小。 温度：温度升高一般可使蛋白质较易盐析出来，但也有相反的情况。 有机溶剂沉淀法 有机溶剂对许多能溶于水的小分子天然产物以及核酸、多糖、蛋白质等生物大分子都能发生沉淀作用。 有机溶剂的沉淀作用主要是降低水溶液的介电常数，如20℃时水的介电常数为80，而82%乙醇溶液的介电常数为40。 对于具有表面水层的生物大分子来说，有机溶剂与水的作用不断使这些分子表面水层厚度压缩，最后使这些大分子脱水而相互凝集析出。不同溶质的沉淀要求不同浓度的有机溶剂，是有机溶剂分步沉淀的理论基础。 有机溶剂沉淀法的优点 分辨能力比盐析法高夕即一种蛋白质或其他溶质只有在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉淀； 沉淀不用脱盐，过滤比较容易； 在生化制品生产中应用比较广泛。其缺点是对某些具有生物活性的分子(如酶)容易引起变性失活，操作常需在低温下进行。 溶剂的选择 用于生化制品沉淀的有机溶剂的选择首先是能和水混溶。使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮，还有二甲基甲酞胺、二甲基亚砜、2-甲基-2,4-戊二醇等。 核酸、糖类、氨基酸和核苷酸等物质的沉淀剂，最常用的是乙醇，对于蛋白质和酶的沉淀，乙醇、甲醇和丙酮都可以使用，但甲醇和丙酮对人体有一定毒性。 核酸的有机溶剂沉淀，除乙醇外，异丙醇等也常被采用。其他一些有机溶剂如二甲基亚矾、氯仿、乙醚等，作为沉淀剂其应用的对象及条件则必须视具体情况而定。 影响因素 温度：有机溶剂沉淀的操作过程宜在低温进行，而且最好在同一温度下进行，才能保证工艺的稳定性。 样品浓度：样品浓度对有机溶剂的影响与盐析情况相似，低浓度样品使用有机溶剂的量大但共沉作用小，利于提高分离的效果；降低样品浓度，样品损失较大(即回收率小),具有生理活性的样品易产生稀释变性。 pH：在样品结构稳定范围下选择溶解度最低处的 pH 有利于提高沉淀效果。 金属离子：金属离子以特殊的方式与许多蛋白质结合，其结果常使蛋白质的溶解度变低。 离子强度：离子强度是影响溶质在有机溶剂与水混合液中溶解度的一个重要因素，盐的浓度太小或太大都对分离有不利影响。 铅盐沉淀法 醋酸