分子生物学课件2Ch2 Genomic DNA .ppt

原核生物的转位因子: IS因子 insert sequence 转位子Tn（ Transposon ）——复合转座子 Mu-噬菌体 Mutation-phage 1.IS 因子 insert sequence 最简单的转位因子 含有末端反向重复序列和转位酶基因 15-25bp 控制转位频率 IS因子插入后, 受体两端产生同向重复序列 长度不一, 几百---一千个碱基 Insertion sequence (IS) elements: Simplest type of transposable element found in bacterial chromosomes and plasmids. Encode only genes for mobilization and insertion. Range in size from 768 bp to 5 kb. IS1 first identified in E. coli’s glactose operon is 768 bp long and is present with 4-19 copies in the E. coli chromosome. Ends of all known IS elements show inverted terminal repeats (ITRs). Fig. 20.1 Fig. 20.2, Integration of IS element in chromosomal DNA. (exon-intron-exon)n structure of various genes b-globin HGPRT (HPRT) total = 1,660 bp; exons = 990 bp histone factor VIII total = 400 bp; exon = 400 bp total = 42,830 bp; exons = 1263 bp total = ~186,000 bp; exons = ~9,000 bp ? 基因内含子的特点： 1.内含子是真核生物独有的，但并不是所有真核基因一定有内含子；（组蛋白基因家族） 2.内含子的数量和长度对不同的基因不同，一般基因越长，内含子越多； 3. 在同一基因家族中，编码序列在进化过程中一直比较保守，而内含子变化迅速，差异较大； （内含子变异较外显子大） 4.内含子与外显子间的连接处有特殊的序列（序列GT——AG）。 高度保守序列 不连续基因剪接成mRNA可能 遵照一种通用机制。 5. 一个基因的内含子可以是另一个基因的外显子。 （阅读框和剪切方式不同） 内含子可能的功能: 1.调控转录速度； 通过与启动子、起始位点的精确碱基配对，阻止或增强RNA聚合酶的活性，从而调控转录。 2. 内含子具有各种剪接信号，使用不同的剪接方式形成不同的成熟mRNA ； 2.4 核外遗传物质的结构及功能 质粒DNA Plasmid 质粒的结构与功能 1. 存在于原核生物、真菌和少数植物细胞中，是一种核外遗传物质，但不是细胞生存所必需的； 2. 有自己的复制起始序列，独立于核DNA进行复制；（有独立的复制系统） 3. 质粒DNA含有少量编码蛋白的基因，这些基因对宿主细胞的生存影响不大，但能改变细胞的某些性状，如抗性、降解有机物的酶等； 4. 质粒是分子生物学中最常见的克隆载体。 质粒DNA的一般特性： 1.多数质粒是闭合环状、双链超螺旋结构（covalently closed and circular DNA），简称cccDNA，少数线状； 2. 质粒具有可转移性，如F质粒； 3. 可整合性；（整合、重组 DNA的交换） 4. 拷贝数； 严紧型（一个或几个） 据细胞中质粒的多少 松弛型（十~几十） 5. 质粒DNA的不相容性 incompatibility 在同一个宿主细胞中，不能同时存在两种同一 不相容群的质粒（同一类型、同一复制系统的不同质粒不能同时存在于同一细胞中，但两种不同类型的质粒可存在于同一细胞中。） 6. 质粒DNA在分子生物学中的应用 基因克隆 DNA扩增 （松弛型质粒） 测序、表达