血清白球蛋白的分离纯化及鉴定1010课件.pptVIP

血清白蛋白、γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定;目的要求;分工合作;操 作;（一）分离纯化的意义;常用的蛋白质分离纯化技术; 一、盐析（中性盐沉淀）;盐析的基本原理;溶解度;+;中性盐的选择;2) 分离效果好：有的提取液加入适量硫酸铵盐析，一 步就可以除去75％的杂蛋白，纯度提高了四倍。 3) 不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的作用。有 的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的（NH4）2SO4保存可达数年之久。 4) 价格便宜，废液不污染环境。;分段盐析;色 谱 法 chromatography;;;二．特点;色谱;1、吸附色谱法 2、分配色谱法 3、离子交换色谱法 4、凝胶色谱法 5、亲和色谱法;二、脱盐（凝胶层析法）;超过滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质;凝胶层析;原理： 1、分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快； 2、小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。;;;; 离子交换色谱（ion exchange chromatography）;阳离子交换剂（cation exchanger）;离子交换剂的化学成分;阳离子交换基;阴离子交换基;;阳离子交换层析过程;;球蛋白中： α及β球蛋白的pI＜6.5，带负电 而γ球蛋白的pI＞6.5(pI7.