植物组织培养技术第七章 植物脱毒快繁技术PPT.pptVIP

（四）其它途径脱毒 1、愈伤组织培养脱毒 2、茎尖微体嫁接 3、化学疗法脱毒  1、愈伤组织培养脱毒?? 愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病毒，由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的愈伤组织中病毒含量下降，甚至检测不出病毒。 愈伤组织的某些细胞不带病毒原因： 1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度； 2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。 愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株。 理由：①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；② 有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。 缺点：植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株 （二）茎尖微体嫁接 概念：将无病毒茎尖（ 0.4~1.0mm ）嫁接在培养基上培养的实生砧木上，以获得脱毒苗木的技术。 适宜：茎尖培养难以生根的植物，如桃、柑橘、苹果等 无病毒茎尖来源：成年无病毒植物、温室培养的植物、热处理植物和脱毒试管苗。 （三）化学疗法脱毒 许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等)对离体组织和原生质体的培养具有脱毒效果。 常用的药品有：8-氮鸟嘌呤、2-硫脲嘧啶、杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。 例如，将100ug2-硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤组织中的PVY (马铃薯病毒)。 三、脱毒快繁材料的选择 应注意以下几点： 1）品种要可靠 2）要选择经当地栽培确认的高产优质的品种来作 为脱毒材料 3）名贵的植物良种 4）植物生长旺盛期，再生率高，脱毒效果好 四、植物病毒的鉴定 1、外观判断法 2、指示植物法 3、抗血清鉴定法 4、电子显微镜检查法 5、酶联免疫鉴定法(ELISA) 1、外观判断法： 带病毒株往往叶片发黄，凹凸不平，畸形，可根据这些表现来判断。但有些病毒表现不明显，仅靠这一方法还不够。 2、指示植物检测法： 指示植物又称鉴别寄主，指的是对某种或某些特定病毒非常敏感，而且症状表现十分明显的植物。 通常不同病毒应选用不同的植物。马铃薯病毒常用指示植物有千日红、曼陀罗、豇豆、辣椒等。 分为2种 ①汁液感染法 ②嫁接检测法 千日红 曼陀罗 豇豆 3、抗血清鉴定法（抗原－抗体反应） 原理：由于病毒是由蛋白质和核酸组成的，是一种较好的抗原。将病毒给动物注射后产生抗体。抗原和抗体结合产生血清反应。抗原：病毒。抗体：是指生物体在外来抗原的刺激下产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中，含抗体的血清称为抗血清。 鉴定方法： 抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。 植物无病毒苗的培育 3. 特点： 特异性高（这种抗血清是高度专一性的试剂），测定速度快，一般几小时甚至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。 植物无病毒苗的培育 4、电子显微镜检查法 病毒有一定的形态（ 球状、杆状、线状等）和大小（ 0.01~0.3um ）。 采用电子显微镜（分辨率0.0001um）可以直接观察病毒，检查出有无病毒存在，并鉴定病毒的种类。 优点：灵敏度高，能在植物粗提取液中定量测定病毒。 5、酶联免疫吸附测定法(ELISA) 把抗原-抗体的免疫反应于酶的催化反应相结合而发展起来的一种综合性技术，灵敏度高，特异性强，发展最快应用最广的方法。 原理：采用酶标记的特异抗体指示抗原-抗体的结合，从而检测样品中的抗原定量测定法。 第七章 植物脱毒快繁技术 一、病毒危害 多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如，草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推移，侵染病毒的种类越来越多。 植物病毒病原体可通过维管束传导。因此，对无性繁殖的植物来说，一旦感染上病毒之后，就会代代相传越趋严重。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。 病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，