仪器分析hplc复习版1011课件.ppt

§3-1 高效液相色谱法的特点 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性、沸点较低的样品， 占有机物的20% HPLC：试样不需气化，只需制成溶液，即可在室温下进样分析 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、高沸点、热稳定性差及生化样品、高分子和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 2．流动相的区别 GC：流动相为惰性气体 对组分无亲合作用，仅起运载作用。 HPLC：流动相可选用不同极性的液体 与组分有亲合作用力，通过参与固定相对组分 作用的竞争，提高柱的选择性、改善分离度， 为选择最佳分离条件提供了极大方便。 流动相种类较多，选择余地广， 改变流动相极性和pH值对分离起到调控作用， 选用不同比例的两种或两种以上液体 作为流动相可增大分离选择性。 1、涡流扩散项及其影响 1、流动相及其流速的选择 2、 4．洗脱方式 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 类似GC的等温度洗脱 2）梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 即不断改变其极性（两个泵） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品） 一、 液-液分配色谱LLC和化学键合相色谱CBPC 二、 液-固吸附色谱（LSC） 三、 离子交换色谱 四、 离子对色谱（IPC） 五、离子色谱IC 若样品为阳离子，用无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离往后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应： R+－OH＋H+Cl- -→ R+－Cl＋H2O R+－OH-＋M+Cl--→ R+－Cl- ＋ M+OH－ 在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。 由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。 六、 空间排阻色谱 §3 - 4 液相色谱固定相 （3）化学键合固定相 2.液-固吸附分离固定相 §3-5 液相色谱的流动相 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 (5) 液相色谱检测器 2）荧光检测器 思考题 １．提高液相色谱中柱效的最有效途径是什么？ ２. 何谓反相液相色谱？何谓正相液相色谱？ ３. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ ４. 在液相色谱中，范氏方程中的哪一项对柱效能的影响 可以忽 略不计？ ５. 水源中多环芳烃化合物，用LC分析，应采用何种检测器? 6. 对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析， 应采用哪一种液相色谱法？ 7． 什么是化学键合固定相？它的突出优点是什么？ 8． 什么叫梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同？ 9. 指出下列各种色谱法，最适宜分离的物质。 （l）气液色谱；(2) 正相色谱；（3）反相色谱；（4）离子 交换色谱;（5）凝胶色谱；(6）离子色谱; (7) 离子对色谱 内梯度(高压梯度): 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱 外梯度(低压梯度): 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合 4）梯度淋洗装置： 分离过程中逐渐改变流动相组成的装置 内梯度(高压梯度)效果好 与GC相比，HPLC柱要短得多， 因此由于柱本身产生的峰形展宽相对要小些。 即，HPLC的展宽多因一些柱外因素引起。 这些因素包括：进样系统、连接管道及检测器的死体积 (3) 进样装置 (4) 色谱柱： 柱子类型可以是正相柱、反向柱、离子交换柱、 多糖柱、蛋白柱等，根据需要来定 一般分离前备有一根很短的保护柱， 柱内填充物和分离柱一样， 流动相进入分离柱之前，通过保护柱， 主要去除样品中强吸附成分和杂质 1）紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应 适于吸收紫外光的物质 特点： 灵敏度高，最小检测浓度达10-9g·mL-1，线形范围高； 流通池很小（1