分子生物学讲座2课件.ppt

第一节　DNA的复制 DNA做为遗传物质的基本特点就是在细胞分裂前进行准确地自我复制(self-replication)，使DNA的量成倍增加，这是细胞分裂的物质基础。 DNA分子复制是指以亲代DNA分子为模板合成子代DNA的过程。 曾经有过多种关于DNA复制方式的学说，包括半保留复制，全保留复制以及分散复制等。 一、复制方式 全保留复制(conservative replication) 在复制过程中新的DNA分子单链结合在一起，形成一条新的DNA双链，而亲本DNA双链仍然被保留在一起。 半保留复制(semi-conservative replication) 分别以两条亲本链为模板，合成二个新链，新形成的双链中，一条是原来的亲本链，一个是合成的新链。 分散复制(dispersive replication) 在复制过程中亲本ＤＮＡ双链被切割成小片段，分散在新合成的两条ＤＮＡ双链分子中 半保留复制 全保留复制 分散复制 1958年Meselson和Stahl利用氮标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制。 他们将大肠杆菌放在含有15N标记的NH4Cl培养基中繁殖了15代，使所有的大肠杆菌DNA被15N所标记，可以得到15N-DNA。然后将细菌转移到含有14N标记的NH4Cl培养基中进行培养，在培养不同代数时，收集细菌，裂介细胞，用氯化铯密度梯度离心法观察DNA所处的位置。由于15N的DNA的密度比普通DNA(14N－DNA)的密度大，在氯化铯密度梯度离心时，两种密度不同的DNA分布在不同的区带。 实验结果表明：在全部由15N标记的培养基中得到的15N-DNA显示为一条重密度带位于离心管的管底。当转入14N标记的培养基中繁殖后第一代，得到了一条中密度带，这是15N-DNA和14N-DNA的杂交分子。第二代有中密度带及低密度带两个区带，这表明它们分别为15N14N-DNA和14N14N-DNA。随着以后在14N培养基中培养代数的增加，低密度带增强，而中密度带逐渐减弱，在紫外光下可以看到DNA分子形成的区带。 为了证实第一代杂交分子确实是一半15N-DNA－半14N－DNA，将这种杂交分子经加热变性，对于变性前后的DNA分别进行CsCl密度梯度离心，结果变性前的杂交分子为一条中密度带，变性后则分为两条区带，即重密度带(15N－DNA)及低密度带(14N－DNA)。它们的实验只有用半保留复制的理论才能得到圆满的解释。 病毒和一些质粒的单链基因组是全保留复制的。 半保留复制方式的实验证明 几种DNA复制方式的解释 二、DNA复制的一般过程 DNA双螺旋是由两条方向相反的单链组成，复制开始时，双链打开，形成一个复制叉(replication fork,从打开的起点向一个方向形成)或一个复制泡(replication bubble,从打开的起点向两个方向形成。)两条单链分别做模板。各自合成一条新的DNA链。 名词说明： 先导链--leading strand 随从（滞后、后滞）链--lagging strand 冈崎片段-- Okazaki fragment DNA复制过程可以人为地分成三个阶段 第一个阶段为DNA复制的起始阶段，这个阶段包括起始点，复制方向以及引发体的形成， 第二阶段为DNA链的延长，包括前导链及随从链的形成和切除RNA引物后填补空缺及连接岗崎片段。 第三阶段为DNA复制的终止阶段。 在DNA复制的整个过程中需要30多种酶及蛋白质分子参加。 （一）DNA复制的起始阶段 1、DNA复制的起始点 很多实验都证明，复制是从DNA分子上的特定部位开始的，这一部位叫做复制起始点(origin of replication)常用ori或o表示。细胞中的DNA复制一经开始就会连续复制下去，直至完成细胞中全部基因组DNA的复制。DNA复制从起始点开始直到终点为止，每个这样的DNA单位称为复制子或复制单元(replicon)。在原核细胞中，每个DNA分子只有一个复制起始点，因而只有一个复制子，而在真核生物中，DNA的复制是从许多起始点同时开始的，所以每个DNA分子上有许多个复制子。 * * 第五节　RNA的结构与功能 引言 DNA是遗传信息的载体，遗传信息的作用通常由蛋白质的功能来实现，但DNA并非蛋白质合成的直接模板，合成蛋白质的模板是RNA。这就是著名的“中心法则”。 ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 别名：吸盘鱼、琵琶鱼、清道夫学名：Hypostomus multiradiatus 　科种：鳅科和