强直性脊柱炎的实验室检测及其意义 课件.pptVIP

 强直性脊柱炎(AS) 是一种慢性、进行性，中轴关节受累 的关节病变，其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现。该病早期进展较慢，但后期发展较快，很短时间内形成 驼背畸形，髋、膝等关节强直，故早期诊断显得尤为重要。 强直性脊柱炎的流行病学 患病率 我国0.3% 高！ （RA 0.36%） 发病年龄 40岁以前发病 高峰20-30 岁 男女比例 10:1 * * * * 强直性脊柱炎的实验室检测及其意义 内容提要： 强直性脊柱炎 特点及其与B27关系 什么是HLA及HLA-B27 MHC、HLA、亚型、关联、RR HLA-B27与哪些疾病相关 HLA-B27 怎么检测 MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP * 强直性脊柱炎相关检测：HLA-B27 Ankylosing Spondylitis，AS 患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织） 可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直 B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！ * 强直性脊柱炎 类风湿性关节炎 地区分布 种族差异大 世界性 性别分布 男＞女 女＞男 年龄 20-30 30-50 家族史 明显 不明显 类风湿因子 （－） （?） AS与HLA-B27 * 健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLA—B27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性 两种错误认识：HLA-B27阳性≠AS！ HLA-B27阳性不会转阴！ HLA-B27阳性率 AS患病率 AS患者B27阳性率 中国人 2-7% 0.3% 90～95% 欧洲白种人 4～13％ 1％ 80～100% 南非黑人 1％ 很低 22% 美国黑人 2～4％ 57% 印地安人 9～50％ 6～12％ 80～100% AS与HLA-B27的关联机制 连锁不平衡学说 分子模拟学说 关节源性肽假说 其他：T细胞受体库假说超抗原假说B27修饰因子假说Cys67模型 * HLA相关概念 主要组织相容性抗原 主要组织相容性复合体（ MHC ⅠⅡⅢ类)：H-2 SLA HLA MHC、HLA复合体……基因 MHC分子、HLA分子……抗原 HLA：人类白细胞抗原（ Human Leukocyte Antigen） * HLA相关概念 * 不同地区HLA-B27亚型的流行病学分布 欧洲、非洲 2705、2702、2707 东南亚（印尼、马来西亚、泰国） 2706、2704、2705 中国、新加坡、日本 2704、2705、2707 HLA-B27相关疾病 * 疾病 HLA-B27阳性率(%) 强直性脊椎炎 90 银屑病性关节炎 ? 55 Reiter’s综合症 37 反应性关节炎 沙门氏菌感染 29.7 志贺氏菌感染 20.7 耶尔森氏菌感染 17.6 淋病双球菌感染 14.0 正常人群 ? 2～7 HLA-B27检测方法及评价 抗原水平 微量细胞毒法 84% ELISA 85% IMS-ELISA 88% 流式细胞术法 93% 基因水平 PCR-SSP 96% * 微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT） 原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。 优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。 缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。 * J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189 ELISA 原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中