HPLC法测定祛湿化瘀口服液中芍药苷含量.docVIP

HPLC法测定祛湿化瘀口服液中芍药苷含量 　　[摘要] 目的 建立祛湿化瘀口服液中芍药苷的HPLC含量测定方法。 方法 采用Agilent Eclipse Plus—C18色谱柱（4.6×150 mm），流动相：乙腈—0.1%磷酸（14∶86）；柱温：30℃；流速：0.6 mL/min；检测波长：230 nm。 结果 芍药苷在0.48～9.12 μg范围内线性关系良好（r = 0.999 9），平均回收率为98.93%，RSD = 0.34%（n = 6）。 结论 本法简便快捷、准确可靠、重复性好，可用于测定祛湿化瘀口服液中芍药苷的含量。 　　[关键词] 祛湿化瘀口服液；HPLC；含量测定；芍药苷 　　[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674—4721（2012）09（a）—0063—02 　　祛湿化瘀口服液是由丹参、赤芍、香附、乳香、没药、益母草等多味药材加工制成的医院制剂，有消炎止痛、活血化瘀之功效，用于湿热瘀阻所致的慢性盆腔炎、输卵软管阻塞，症见带下、少腹及腰骶疼痛等。经过多年临床经验证明，祛湿化瘀口服液质量稳定，疗效可靠。为了更好的控制该制剂的质量，确保人体用药安全，经查阅有关资料及多次试验，本文所述方法测定芍药苷含量，取得了满意的效果，可以有效的控制该制剂的质量。报道如下： 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　岛津AUW220D电子分析天平（日本岛津公司）， DSQ10260超声仪（上海特惠电子仪器有限公司），Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）。 　　1.2 试药 　　芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736—201035）；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。祛湿化瘀口服液（批号：111202、111216、111228）由民权县人民医院提供。 　　2 方法与结果 　　2.1 供检测溶液的制备 　　2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品约12.00 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇振摇使完全溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液作为芍药苷对照品溶液。 　　2.1.2 样品溶液的制备 精密量取祛湿化瘀口服液3 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液作为样品溶液。 　　2.1.3 阴性样品溶液的制备 取处方中的药材用量，除去赤芍，按照生产工艺制成阴性制剂，按照供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液，供试验用。 　???2.2 色谱条件及系统适用性试验 　　依据中华人民共和国药典中关于芍药苷的含量测定方法[1]96—97。色谱柱：选用Agilengt Eclipse Plus—C18色谱柱（4.6×150 mm）；流动相：乙腈—0.1%磷酸（14∶86）；流速：0.6 mL/min；进样量：10 μL；检测波长：230 nm；理论板数按芍药苷峰计算不低于3 000。芍药苷与相邻峰的分离度大于1.5，峰型对称。 　　取样品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液按上述条件测定，结果证明，样品芍药苷的分离度良好，理论板数高于3 000，阴性对照无干扰。见图1。 　　2.3 线性关系考察 　　取上述对照品溶液，按照“2.2”项下的色谱条件，分别进样1、3、5、7、9、11、13、15、17、19 μL，检测芍药苷峰面积，以芍药苷峰面积为纵坐标（Y），以进样量为横坐标（X），计算线性回归方程：Y = 235.056 74X+12.520 03，相关系数r = 0.999 9。实验结果表明，芍药苷在0.48～9.12 μg检测范围内线性关系良好。 　　2.4 重复性试验 　　取同一批样品9份，按供试品溶液的制备方法制备样品溶液，进样10 μL测定芍药苷的含量，结果RSD = 1.2%（n = 9）。 　　2.5 精密度试验 　　取上述芍药苷对照品溶液，重复进样6次，每次10 μL，检测芍药苷峰面积，结果6次峰面积的RSD = 0.52%（n = 6），表明精密度良好。 　　2.6 稳定性试验 　　取同一份样品溶液，在不同的时间点：0、2、4、8、12、16、24 h进样测定芍药苷的峰面积，结果RSD = 0.48%，样品溶液在24 h内峰面积稳定。见表1。 　　2.7 加样回收率试验 　　精密量取6份已知含量为13.544 mg/mL的样品溶液，分别置1～6号50 mL容瓶中，另取芍药苷120 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，分别精密加入对照品储备液3 mL于1～6号容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。用Agilengt Eclipse Plus—C18色谱柱（4.6×1