8 人禽流感检测结果的解释分析.pptVIP

第一部分 检测标本的采集 呼吸道标本的采集 血清标本的采集 组织标本的采集 消化道标本的采集 人禽流感病例呼吸道标本的采集 鼻拭子 鼻咽拭子 鼻咽吸取物 鼻洗液 咽洗液 气管吸取物 气管肺灌洗液 人禽流感病例呼吸道标本的采集 尽量采集深部呼吸道标本 肺穿刺液 深部吸取液 血清标本的采集 采集急性期和恢复期血清； 急性期血清应该在病人发病后立即采集，一般不要超过7天，如果没有采集到7天内血清，在能够采集的时候立即采集； 恢复期血清在病人发病后2-3周采集，如果病人死亡，在死亡前应采集一份血清； 病人恢复后应定期采集血清； 采集血清时不能少于5ml； 最好采集全血和血清标本。 组织标本的采集 肺活检组织 尸检组织，尸检组织标本应尽可能采集各种器官组织，在采集过程中应尽可能避免交叉污染，每种尸检组织标本可分为两部分，一部分立即用于病毒的分离检测，如果不能马上进行，应该保存于-70oC；另外一部分保存于福尔马林中，用于病理的研究。 消化道标本的采集 粪便标本 特别是有腹泻症状的粪便标本 PBS 或者细胞培养液 加入以下抗菌素和0.5%BSA -氨苄青霉素 (2 x 106 IU/litre)- 链霉素 (200 mg/litre) - 多粘菌素 B (2 x 106 IU/litre) - 庆大霉素 (250 mg/litre) - 制霉菌素 (0.5 x 106 IU/litre) - 盐酸氧氟沙星 (60 mg/litre), and - sulfamethoxazole (0.2 g/litre) 标本的保存和运输 用于病毒分离的标本应保存于4oC,并且立即送往实验室进行接种，如果在48小时内不能进行接种，应该保存于-70oC；标本应避免反复的冻融（降低分离率）； 血清标本可以在4oC保存7天，否则应保存于-20oC； 标本的保存和运输应遵守国家生物安全的相关规定。 任何成功的流感大流行的准备都依赖于对新出现毒株的正确的诊断。 对于可能是A型流感病毒的每个样品最初的实验室检测应该快速并且能够排除其它常见的呼吸道病毒感染。最理想检测方法是24小时内能出结果。 2005年以来中国人禽流感病例的实验室诊断结果 2005年以来中国人禽流感病例的实验室诊断结果（续） RT-PCR技术的建立 临床标本的RT-PCR检测 Real-time PCR 灵敏度检测 临床标本的Real-time PCR检测 Luminex xMAP technology MDD 对呼吸道病毒的诊断 MDD对流感病毒亚型的鉴别 NASBA H5N1 标本的检测结果 NASBA技术的特点 NASBA 技术, 与Real-PCR 方法灵敏度相当。 NASBA 技术操作简便，而且是一种高通量的方法。 与PCR 的产物DNA 分子不同，RNA 分子不易对实验仪器和环境造成污染。 血清学检测方法 HI( HRBC) ELISA SRH MN HI assay 不同种属 红细胞HI实验的比较 HI(HRBC) assay 使用U型板 4 ℃代替室温孵育。 每次病毒的滴度要回滴 马血球要新鲜采集，一周内使用。 SRH原理示意图 SRH 实验的优化 最适的抗原浓度是常规血凝板滴定 的1000 HAI。 1% agarose。 鸡血球更适合于SRH实验中的溶血圈的产生。 SRH技术的特点 简便、可靠、重复性好、特异性强、敏感性高，不受血清中非特异性抑制素影响。 血清用量少, 并不必进行稀释。 可对大量血清标本进行测定。 一般实验室均可开展，特别适用于我国基层地区。 单扩溶血的特异性对H5N1患者血清的测定 微量中和实验 (MN）的特点 微量中和实验 是诊断人感染禽流感的最好的血清雪方法。 敏感性高。 特异性强( strain selection) 。 每次实验要设病毒和细胞对照，病毒要回滴 第三部分: 检测结果和分析 Receptor Specificity (HA 226-228) Drug surveillance (M2 inhibitor drugs) Drug surveillance ( NA inhibitor drugs) WHO recommended candidate H5N1 vaccine viruses for potential use as pre-pandemic vaccines A/Hongkong/213/03 A/Vietnam/1194/04 A/Vietnam/1203/04 A/Indonesia/5/2005 A/BHG/QH/1A/2005 A/WPS/Mongolia/244/2005 A/Turkey/Turk