实验二显微镜油镜的使用、细胞形态的观察与革兰氏染色.ppt

实验二 显微镜油镜的使用、细胞形态的 观察及革兰氏染色 1、显微镜油镜的使用 2、细菌形态的观察（示教） 3、革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 1.光学部分:接目镜 、 接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、反光镜等)。 它使检视物放大,造成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。 显微镜的放大倍数和分辨率 油镜(OI,HI,100X)，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 （三）显微镜保养和使用中的注意事项 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏油；第二遍擦镜纸蘸上乙醇再擦镜头；第三遍再用干净的擦镜纸擦去多余的乙醇。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 （四）、革兰氏染色原理 1、实验原理（p.29） 革兰氏染色法：细菌学中重要的鉴别染色法。 有芽孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应； 弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈现阴性反应。 1、菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌 2、仪器：显微镜 3、染色液：草酸铵结晶紫染色液、Lugol(路哥尔氏)碘液、95％乙醇、0.5%沙黄染色液 4、材料：载玻片、香柏油、乙醇、擦镜纸 （一）显微镜油镜观察操作方法 在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到最合适的观察点。 油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许乙醇擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的乙醇。 本实验室按小组使用固定编号的显微镜，显微镜的保养由对应学号的同学负责。实验过程中如果所用显微镜不能使用，自行与其他同学调节。但显微镜如果出现问题，由对应学号的同学承担责任。 （二）细菌形态的观察（示教？） 基本形态：杆菌，球菌（注意大小、染色性、排列） 特殊结构：鞭毛，芽胞，荚膜（先找到菌体，再仔细观察特殊结构） （三）革兰氏染色的操作方法 （三）革兰氏染色的操作方法 （1）涂片：先在载玻片左右端各滴一滴生理盐水，分别挑取大肠杆菌和白色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片（采用三区涂片法：分别将上述2种菌液延伸至玻片中央，混匀并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可过于浓厚。 染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 ⑵ 干燥：把上面涂好的片于室温下自然干燥(或者用吹风机)。 ⑶ 固定： 涂面朝上，在火焰上方过几次以热固定菌体（此操作的目的是使得细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上）。固定时通过火焰1—2次即可。 注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，温度过高会改变甚至破坏细胞形态。 ⑷ 初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌膜为宜）初染1--2分钟min，水洗。 ⑸ 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。 ⑹ 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。 注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌（假阳性），脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。 ⑺复染：用番红液染1—2min,水洗。 ⑻镜检：干燥后（室温下晾干），观察（先在低倍镜（40X），然后在油镜（100X）下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。 注意：以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 (10)实验结果的记录： 要求在用显微镜观察（左眼观察）的同时在实验记录本上画下你所观察到的细菌的形态。 本实验每人做一张。 实验报告中要画图表示结果（40X倍镜、100X油镜）。 思考