8基因治疗原理与研究进展PPT.ppt

1 第十三章基因治疗原理与研究进展 主讲：曾赵军 分子生物学研究中心 2 根据靶细胞不同，基因治疗分为： 体细胞(somatic cell)基因治疗 生殖细胞(germline)基因治疗 只限于某一体细胞的基因的改变 只限于某个体的当代 对缺陷的生殖细胞进行矫正 当代及子代 3 基因治疗的概念 将某个遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的方法。 4 1. 基因治疗的策略 内容提要 2. 基因转移技术 4. 治疗基因的受控表达 3. 基因干预 5. 基因治疗的应用研究 6 基因治疗的问题与展望 5  第一节 基因治疗的策略 7 定向整合的条件:转导基因的载体与基因组DNA具有相同的序列。带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点，进行部分基因序列的交换，使基因置换这一治疗策略得以实现。 基因同源重组技术又称为基因打靶(gene targeting） 基因同源重组技术 8 缺陷基因 正常基因 重组载体 正常基因 定位重组技术 染色体 9 二、基因添加 (gene augmentation) 定义：通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。 类型： 在有缺陷基因的细胞中导入相应的正常基因，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能； 向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利用其表达产物达到治疗疾病的目的。 10 定义：采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。 例如反义核酸、核酶或干扰RNA技术等。 三、基因干预（gene interference） 11 为恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。 原理:将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。 四、自杀基因治疗 12 自杀基因的作用机制 13 TK/GCV：单纯疱疹病毒（herps simplex virus, HSV）Ⅰ型胸苷激酶（thymidine kinase, tk）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（ganciclovir, GCV）转变成毒性GCV三磷酸核苷，后者能抑制DNA聚合酶活性，导致细胞死亡。 （一）自杀基因系统 14 CD/5-FC：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase, CD）基因，在细胞内将无毒性5-氟胞嘧啶（5-FC）转变成毒性产物5-氟尿嘧啶（5-FU）。 （一）自杀基因系统 15 旁观者效应：“自杀基因”导入后，不仅使导入了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻或远处的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。 其明显增强了自杀基因的肿瘤杀伤作用。 （二）旁观者效应 16 五、基因免疫治疗 通过将抗癌免疫增强的细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。 17 第二节 基因转移技术 18 基因治疗的两种方式 in vivo ex vivo 靶细胞 将目的基因直接输入体内 将目的基因导入患者靶细胞,体外培养 将重组靶细胞回输体内 19 基因治疗的方式 直接体内疗法（in vivo） 是指将目的基因直接导入体内有关的组织器官，使其进入相应的细胞并进行表达。 2. 间接体内疗法（ex vivo） 是指在体外将目的基因导入靶细胞，经过筛选和增殖后将细胞回输给患者，使该基因在体内有效地表达相应产物，以达到治疗的目的。 20 一、病毒介导的基因转移系统 病毒载体介导的基因转移效率较高，因此它也是使用最多的基因治疗载体。据统计，有72%的临床实验计划和71%的病例使用了病毒载体，其中用得最多的是逆转录病毒载体。 21 （一）逆转录病毒（Retrovirus）载体 人类免疫缺陷病毒 （HIV） 22 逆转录病毒的生活周期Ⅰ 23 逆转录病毒的生活周期Ⅱ 24 逆转录病毒的生活周期Ⅲ 25 （1）两端各有一长末端重复序列LTR。 1. 逆转录病毒前病毒的结构特点 （2）LTR由U3、R和U5三部分组成。 U3内有增强子和启动子； U3和U5两端分别有病毒整合序列(IS) ； 在R内还有poly(A)加尾信号。 26 1. 逆转录病毒前病毒的结构特点 （3）病毒有三个结构基因： gag、pol和env基因 （4）5ˊ端LTR下游有一段病毒包装所必需的序列（ψ）及剪接供体位点(SD)和剪接受体位点(SA)。 27 2.逆转录病毒介导的基因转移系统 (1) 逆转录病毒载体 保留病毒颗粒的包装信号，而缺失