克隆与医学PPT.ppt

我国动物克隆研究 童第周 童第周和严绍颐等合作在1963年7月出版的《科学通报》上发表题为《鱼类细胞核移植》的论文(英文论文发表于1965年的《科学通报》)，首先向国内外报道了鱼类的核移植：以金鱼和鳑鱼为材料，曾于1961年开始进行鱼类细胞核移植，经过两年的摸索，证明细胞核的移植也可以在鱼类中进行。 克隆山羊“阳阳”降生在中国西北农林科技大学种羊场。 中国第二头克隆牛“科科”目前状况一切正常。 2005年4月，国际首例体细胞克隆亚洲黄羊在山东临沂顺利降生 供体—黄羊的成纤维细胞 受体—山羊的卵母细胞 陈大元研究员 课题组 2005年8月5日李宁教授领导的课题组经过一年多的科技攻关，一头体重1130克的克隆小香猪于在河北省三河市明慧养猪公司顺利诞生。 杜淼 研究员 陈大元——中国异种克隆之父 周琪 李宁 “ 973”项目“农业动物遗传育种与克隆的分子生物学基础研究”首席科学家 动物克隆技术的基本方法和原理 原理：细胞的全能性。动物中几乎所有的细胞都含有完全相同的遗传信息，具有发育的全能性。而受体细胞质中含有启动细胞核重新编程的各种因子，供体核在卵细胞质因子的作用下，可以重新回到未分化的状态。 高等动物克隆的三条途径 胚胎分割技术 体细胞与去核卵细胞融合技术 细胞核移植技术 胚胎分割技术：在２细胞期至囊胚期 以前的早期胚胎用酶或机械方法分割， 然后由分割的细胞分别发育成个体 体细胞与去核卵母细胞融合技术 供体细胞不一定是核，可以是含部分细胞质的细胞甚至是整个细胞； 不进行核移植，而是通过细胞融合技术，使供体细胞与去核卵细胞融合获得重构胚。 细胞核移植技术 显微操作仪 Step 1. 供体细胞的准备 供体细胞的类型 胚胎 细胞 胚胎干细胞 体细胞 2. 供体细胞所处的细胞周期与克隆效率 供体核处在GO/G1期：容易获得最佳克隆效果 　　这时的细胞虽然代谢比较活跃，但细胞却置身 　　于细胞分裂周期之外； 　 供体核处在Ｓ/G２期：受体卵母细胞质指导的潜 　　在的基因组复制将导致异常的发育。　 3. 获取ＧＯ／Ｇ１期供体细胞的方法 人工捕获的方法：通过限制细胞培养基中的某种成分，从而使大部分细胞滞留在细胞周期的某一阶段，Wilmut等就是通过该种方法获取G0期细胞的； 通过选择细胞类型来获得：对于不同类型的细胞，其在细胞周期的不同阶段上的细胞数目相差很大，如刚排出的卵母细胞其周围的卵丘细胞90%以上处于G0期或G1期。Wakayama等就是通过该方法获得处于G0或G1期的供体核的。 4. 供体细胞细胞核的获得 Step 2 受体细胞的准备 １.　受体细胞的类型　 ＭⅡ： 　 极体 Ｓ期：激活后的卵母细胞 MPF的作用 MPF(Mature meiosis/metosis promoting factor)的活性在卵母细胞成熟过程中的第一次和第二次减数分裂中期最高，而MPF水平的高低可影响供体染色质的状态和复制，MPF的作用可使供体核核膜破裂，发生早熟染色体凝集（PCC, premature chromosome condensation），不利于维持染色体的倍性。 2. 受体细胞的周期与克隆效率 ＭⅡ：胞浆中的MPF水平很高，只能接受处于G0或G1期的供体细胞 　 原则：受体细胞与供体核的周期要匹配 Ｓ期：激活后的卵母细胞 。MPF的水平下降，原则上可以采用任何细胞周期的供体细胞 　 3. 去核卵母细胞的获得 卵母细胞的获得：通过超排卵来获得，或卵巢的卵泡，经体外培养成熟而获得 超排卵：通过注射激素：PMSG（孕马血清促性腺激素）、hCG（人体绒毛膜促性腺激素）、FSH(卵泡刺激素)。 以兔的超排为例：挑选处于发情间期性成熟的雌性家兔（6-8月龄），肌肉注射FSH共30单位（分6次，每次间隔12小时），最后一次肌肉注射FSH 12小时候，静脉注射hCG 100单位，在注射hCG 13hr后，经过外科手术，用PBS冲洗输卵管回收处于MⅡ期的卵母细胞。 回收处于MⅡ期的卵母细胞 输卵管冲胚：顺向冲胚、逆向冲胚 子宫角冲胚 子宫内膜 子宫肌层 子宫外膜 卵巢 发育中的卵泡 输卵管壶腹部 卵泡破裂排卵 输卵管 子宫 克隆与医学 引 言 克隆的一般概念 动物克隆的发展历史 动物克隆技术的基本方法和原理 动物克隆存在的问题 动物克隆技术的应用前景 Herbert J. Webber Who first uses clon as a biological term 克隆的一般概念  克隆：是指通过无性方式由单个细胞或个体产生的和亲代非常相似的一群