HE切片的规范化操作必读.docVIP

HE切片的规范化操作 病理诊断发展到今天，出现了大量的辅助手段，但最重要的还是HE切片。由于HE切片是一个传统而又经典的方法，步骤相同，所以很多人会觉得没什么好学的，其实每个人在具体操作过程中，多多少少会有一点不同之处，正是由于这一点不相同之处，才使得切片质量各有千秋，这就是所谓的经验。随意性大，质量不稳定。病理技术有很多小窍门，有的是在牺牲制片质量的前提下发明的，使用者往往自己不清楚。各个地方的操作方法不同，习惯不同，最终导致制片质量各不相同。能做一张优质的HE切片并不难，难的是做好所有的切片。一个细小的环节出现问题，便会影响以后的所有步骤。 如何提高病理切片的质量和稳定性，是我们目前急需解决的问题。我认为规范化操作是病理切片的质量保证，而量化管理增加了切片质量的稳定性.所谓规范化,就是在操作过程中,对使用试剂种类、PH值、浓度、温度、时间以及操作的手法都有详细的规定，尽可能的减少人为的影响，减少变量，减少影响制片质量的条件。所谓量化，就是把以前经验的东西通过总结，用量来衡定。比如说我们更换脱水试剂，一般都是要等组织不好切了才换，这样总有几天片子质量欠佳；也有的是几天到了就换，组织多时脱水液的水份就多，后面几天可能组织就脱不好；组织少了脱水液倒了很浪费，我们通过几年的总结，发现组织的量和试剂的更换时间有一定的规律，用量来控制脱水的更换时间更具科学性。还有苏木素、依红也是如此。 要想搞好制片质量，首先应该提高病理技术人员的素质，培养技术人员的敬业精神和强烈的工作责任心，这要有科室主任和病理医生的理解和支持，相互尊重，互相团结，互相配合，摆正医生与技术员的关系和位置，充分发挥技术员的积极性和主观能动性；各地应该建立质控组织，技术交流和行政监督的手段，促进病理技术的发展。 下面我讲的是病理切片的规范化操作： 1、取材 取材的好坏，直接影响切片的质量。医生在取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2~0.3cm为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平没肌瘤致密的或试剂不易渗入的应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中还应十分注意组织内是否有缝或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，应与技术室讲明，在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。 2、固定 固定是技术室工作的第一步，也是在整个制片过程中无法补救的一步。所谓“固定”，就是组织离体后，用各种办法使其细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。另外，组织固定后，均呈一定的硬化状态，增加了组织的韧性，而且不易变形，有利于以后的组织处理。所以组织一旦离体必需及时固定，固定液的量应组织的5倍以上。固定的关键主要与固定的及时性、固定液的选择、固定液的浓度、固定的温度和时间有关。最常用的固定液为10%的福尔马林（甲醛），福尔马林渗透性强，固定均匀，组织收缩小，但经酒精脱水后收缩较大。甲醛不能使白蛋白和核蛋白沉淀。甲醛通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用。由于10%福尔马林受到福尔马林的质量，使用时的挥发和取材时带入水分拣影响，浓度容易被降低致组织固定不足， 而高浓度的福尔马林，降低了对组织的穿透性，形成周围固定好而中央固定不到的现象。所以可以适当的增加福尔马林的浓度，以12-15%左右为佳。 PH7.0中性缓冲福尔马林对大多数抗原有很好的保存作用，而非中性缓冲福尔马林略差，通过大量实验证明，二者有差异，但并不十分明显。由于HE染色时细胞核的最佳着色点PH为3.5~4.5，中性福尔马林对苏木素染色有一定影响，细胞核容易发灰。而病理诊断，主要还是以HE切片为主，就常规HE规范化而言，用酸性福尔马林比中性福尔马林要好，每 95毫升12%的福尔马林内加入5毫升的冰醋酸。但从规范和全面角度出发， 应该使用中性缓冲福尔马林。当然如果根据常规切片、免疫组织化学和分子生物学的需要不同选用二种或二种以上不同的固定分开制片是最好的解决办法。骨髓、结缔组织多的组织可用Bouin液固定便于，经Bouin液固定后的组织必须流水冲4小时以上。送检来的大器官应及时切开固定，大标本取材后（2cm厚）固定时间需要6~12个小时，小标本一般需要3~6个小时；当室温低18℃时，应在37℃以下的温箱内加温4~6WH IH JF 。 3、水洗 固定后应该水洗 （10~20分钟），这一步通常被很多人所忽视，固定后不水洗，容易造成脱片和染色不