实验五. 细胞染色体制备PPT.pptVIP

* 组织培养细胞染色体的制备 实验五 实验目的 实验原理 实验试剂与仪器 实验步骤 注意事项 了解组织细胞的培养方法。 掌握染色体标本的制备方法。 一、实验目的 二、实验原理 二、实验原理 处于指数生长期的细胞，经过短期培养后，用秋水仙素处理，可把细胞分裂阻截在中期，再经过低渗、固定、滴片和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察。 1. 秋水仙素 ①阻止微管组装，破坏纺锤体阻断细胞有丝分裂。 ②使染色体收缩成一定的形状。 目的 : 获得大量的中期分裂相细胞。 2. Carnoy固定液 新配置的甲醇 ：冰醋酸混合液 (3:1)。 能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果 3. 低渗液（ 0.075M/L KCl ） 低渗的目的是凭借反渗透作用使细胞膨胀（但不破裂）染色体铺展，同时可使粘附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态 4. 染料 （ Giemsa ） 不是一种单一染料，而是天青、伊红、甘油和甲醇的混合物，配制后原液储存， 染色后，染色质呈红色，细胞核是蓝色。 四、实验步骤 培养液4ml 胎牛血清1ml 培养24小时 每ml培养液 加1ug 继续培养3-5小时 培养 秋水仙素 培养瓶 取样