第13章 基因诊断(lsq)PPT.ppt

酶切 电泳 放射性探针杂交 图谱多态性 ?-地中海贫血 Homo Hetero Normal 5.2kb 4.6kb ?-珠蛋白基因3?末端缺失0.6kb 5? 3? BgI II BgI II 5.2kb 5? 3? BgI II BgI II 4.6kb （二）基因表达异常的诊断 基因 表达 异常 量的异常 质的异常 量增多、不该表达而表达 量减少、该表达不表达 1. mRNA相对定量 (1) 点杂交(或狭缝杂交)光密度扫描法； (2) RT-PCR； 2. mRNA绝对定量 RT-PCR/竞争性PCR 3. mRNA长度分析 Northern杂交法，RT-PCR 产物电泳分析 （三）外源基因侵入的诊断 核酸分子杂交 PCR技术 许多病原体的基因结构已被阐明，设计基因特异性探针，或合成特异的寡核苷酸引物，可直接从临床标本中检测病原体基因组核酸(DNA或RNA)的存在，即可早期、快速、敏感、特异地确定病原体的存在。 三、某些疾病的基因诊断 （一）遗传性疾病的基因诊断 ★ 对疾病致病基因结构异常的直接诊断 （已知基因结构异常） ★ 对疾病相关遗传标志的连锁分析 （间接诊断、未知基因结构异常） 对疾病相关遗传标志的连锁分析 连 锁： 　 是指同一条染色体上位置相邻的基因，常被一起遗传而没有发生重组。（相伴随遗传） 连锁分析： 　 利用与致病基因相连锁的某些基因，作为遗传标志．通过鉴定遗传标志的存在与否，而判断个体是否带有致病基因． 目 的： 　 对家族成员患病风险的分析。产前诊断 特 点： 　 连锁分析又称间接诊断，在对致病基因及其基因缺陷还不甚了解的情况下，对遗传性疾病的诊断。 条 件： 　 1.有较完整的家系资料，家系中必须有先证者 2.所选择的“遗传标记”与致病基因越近越好。 致病基因 Ｇ Ａ 连锁遗传基因 第六节 基因诊断 Genetic Diagnosis 第十三章 基 因 诊 断 基因诊断 基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变 蛋白质质量的异常 基因表达异常 蛋白质数量的异常 外源基因的入侵 病毒感染等 (一) 诊断水平 基因水平 (二) 诊断材料 DNA和RNA (三) 诊断内容 1. 对于内源性基因来说：基因结构和表达是否异常 2. 对于外源性基因来说：病毒核酸、细菌质粒、寄生虫DNA (四) 诊断途径 1. 直接检查基因结构是否存在：DNA点突变、缺失插入、基 因重排、染色体畸变、mRNA剪接缺失错位或结构变化等 2. 检查基因转录产物mRNA： ① 已经转录还是没有转录？ ② 应该转录还是不应该转录？ ③ ?转录正常、过量还是过少？ 3. 检查基因表型：正常还是异常，进行分析研究。 (五) 诊断目的 1. 确诊相应疾病或得出相应结论。 2. 是防治疾病或基因治疗的根据。 基因诊断概念的界定 基因诊断 一、基因诊断的概念和特点 (一) 定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 是以DNA和RNA为诊断材料,利用分子生物学技术,通过检查基因存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。 基因诊断的原理： DNA诊断----检测相关基因的结构及其表达功能是否正常。RNA诊断----对表达产物mRNA质和量表达的分析。 （二）特点 1．遗传性疾病 2．感染性疾病 3．肿瘤 4．法医学的应用 5．组织病理学 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强 早期诊断 二、基因诊断常用技术和方法 * 核酸分子杂交技术 Southern印迹杂交 　　　 Northern印迹杂交