第20章 高效液相色谱PPT.ppt

化学键合相色谱 键合固定相类型 键合固定相的制备 反相键合相色谱法 正相键合相色谱法 一、键合固定相类型 键合固定相的基质材料主要为硅胶 （1）疏水基团 不同链长的烷烃（C8, C18） 和苯基等 （2）极性基团 氨丙基、腈乙基、醇和醚等 （3）其它基团 离子交换基、手性识别基、配基（如酶、抗原、激素等） 二、键合固定相的制备 （1）硅酸酯 二、键合固定相的制备 （2）Si - C 和 Si - N 型 二、键合固定相的制备 （3）硅烷化 三、反相键合相色谱法 流动相极性大于固定相的色谱法 固定相 保留机理 溶剂强度 溶剂选择性 流动相及其选择 应用例 （1）固定相 最常用的固定相： C18 (ODS: chemically bonded octadecylsilane) C8和其它短链烷烃、苯基键合硅胶固定相 ODS示意图 （2）保留机理 疏溶剂作用理论 试样组分的流出顺序 组分流出顺序为： 疏水性小者先流出 疏水性大者后流出 （3）溶剂强度 反相液相色谱最常用的溶剂： 甲醇 (methanol)、乙腈 (acetonitril)、四氢呋喃 (tetrahydrofuran)、水（缓冲溶液） 用极性参数 P 表示 极性大，强度弱； 极性小，强度强 （为什么？） Pmethanol 5.1 Pacetonitril 5.8 Ptetrahydrofuran 4.0 Pwater 10.2 混合溶剂的强度 PAB = ?APA + ?BPB （4）溶剂选择性 （5）流动相及其选择 反相液相色谱流动相的基本组成：水+有机改性剂（甲醇或乙腈或四氢呋喃） 选择： 1.用水和甲醇（或乙腈）的混合溶剂为流动相，通过改变混合比优化 k 2. 等强度更换有机改性剂，提高选择性 流动相选择例 （6）应用例 高尔夫球场杀虫剂的分离 梯度 四、正相键合相液相色谱法 流动相极性小于固定相极性的键合相液相色谱法 固定相：含有极性基团的键合相，如 -CN, -NH2, -OH 流动相： 流动相组成与液固色谱相同，但强度用极性参数 P 应用：分离异构体、极性不同的化合物、不同类型 的化合物 非离子表面剂的分离 20-6 离子交换色谱与离子色谱 以离子交换剂为固定相，借助于试样中电离组分对固定在交换剂上的带相反电荷的离解部位亲合力，使其彼此分离。 分离对象：离子或在溶液中可电离的物质 无机离子混合物 有机物：氨基酸、核酸、蛋白质等 主要内容 离子交换原理 固定相 流动相 应用例 离子排斥色谱 离子色谱 一、离子交换原理 离子交换通式 阳离子交换 R-SO3-H+ + M+ R-SO3-M+ + H+ 阴离子交换 R-NR3+Cl- + X- R-NR3+X- + Cl- 离子交换通式 一般形式： R-A + B R-B + A 平衡常数（离子交换反应的选择系数） 电导检测器结构示意图 (7)联用技术 HPLC-MS HPLC-NMR HPLC-FTIR UPLC-SQD HTC Ultra Agilent 6210 LC-TOFMS LC-MS Quatro Premier(Q-Q-Q) QTof Premier Q-Trap(Q-Q-LT) LC-MS(多级质譜串联) APCI APPI application (8)梯度淋洗装置 低压梯度 高压梯度 高效液相色谱的主要类型 液固色谱 化学键合相色谱 离子交换色谱与离子色谱 离子对色谱 尺寸排阻色谱 亲和色谱 20-4 液固色谱（吸附色谱） 固定相 保留机理 流动相及其选择 应用例 一、固定相 液固色谱的固定相 - 固体吸附剂 常用：硅胶和氧化铝 其它：氧化锆、氧化钛、氧化镁、分子筛、聚酰胺、活性炭等等 硅胶是最重要的液固色谱的固定相 硅胶的表面结构与性质 二、保留机理 液-固色谱采用极性固体吸附剂如硅胶等作为固定相。根据流动相的极性不同，在固体吸附剂表面形成单分子或双分子层溶剂分子吸附层。当样品分子进入色谱体系，溶质保留和分离选择性决定于： 溶质分子和溶剂分子与吸附剂表面活性点的竞争。 流动相对样品的溶解能力。 溶质分子的各种官能团与吸附剂表面活性点的分子间相互作用。 二、保留机理 硅胶的吸附中心 极性相互作用 对试样的保留顺序 选择性 硅胶的吸附中心 硅胶的吸附中心硅羟基 与样品组分相互作用 偶极-诱导偶极 偶极-偶极 氢键 ?-络合物（孤对电子、双键） 极性相互作用 选择性