第4章 抗体PPT.ppt

第四章 抗　体 　　　　Antibody;抗体（antibody,Ab）: 是指由浆细胞（PC）合成和分泌的，能与Ag进行特异性结合的糖蛋白。;Ig的存在形式 ;1.2 抗体的发现;1.3 抗体的理化性质;;;γ;;2.1.2 可变区和恒定区;VL;互补决定区（complementarity-determinant region, CDR ）;;L链C端1/2处，105个aa; H链C端3/4－4/5处，331-431个aa。 氨基酸组成及排列顺序相对恒定　;2.1.3 免疫球蛋白的功能区;;3) 功能区的作用：;位于CH1和CH2之间。它不是一个独立的功能区，但是它与其它的功能区相关。铰链区可以发生一定程度上的转动或伸展，使抗体分子上的两个抗原结合位点更好地与两个抗原表位发生互补。同时由于CH2和CH3构型变化，使Ig显示出活化补体、结合组织细胞等生物学活性。;2.1.5 其他结构;分泌片（secretory piece，SP） 由粘膜上皮细胞合成。 是分泌型IgA（sIgA）的结构成分。 作用： 保护sIgA抵抗外分泌液中蛋白酶的降解， 介导多聚IgA向粘膜上皮外主动输送。; 2.2.1 Porter　 木瓜蛋白酶papain 　1) Fab段　 2个　抗原结合片段 　　;;2.2.2 Nisonoff 胃蛋白酶pepsin 1) F(ab’)2 段 1个 结合颗粒性抗原出现凝集反应 2) Fc’段　 1个 无生物学活性;;;2.3 抗体的多样性与免疫原性;1、 同种型（isotype） 指同一种属内所有个体共有的Ig抗原特异性的标记。　;是指同一种属不同个体间的Ig分子抗原性的不同。　　;3、 独特型（idiotype，Id）;2.4.1 V区的功能---特异性结合抗原;体内：;中和毒素;阻止细菌粘附;中和病毒;2.4.2 C区的功能;激活补体;Antibody + complement- mediated damage to E. coli;2) 结合Fc受体;Macrophage;②抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC） (Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity);Y;3）介导I型超敏反应;4) 穿过胎盘和粘膜;;根据重链靠近羧基端氨基酸组成及排列顺序不同，将重链分为五种：γ、 α、 μ、 δ、 ε IgG、IgA、IgM、IgD、IgE;3.1 IgG 　;; 1)五聚体，分子量最大(900 kd)，巨球蛋白； 2)人类发育过程中最早合成的Ig； 3)体液免疫应答最先产生的 Ig 感染早期免疫； 4)半衰期短: 5d ----- 血清中特异性IgM 水平增高提示有近期感染。 5)激活补???； 6)IgM 不能通过胎盘?脐带血或新生儿血清中IgM水平升高表明胎儿有宫内感染； 7)自身抗体 ? 自身免疫病，如；类风湿因子。;;3.3 IgA (局部Ab);1) 产生部位：粘膜淋巴组织; 1)单体分子； 170kD 2) 存在形式： 分泌型 --- 血清中，功能不清； 膜结合型 --- B细胞表面, 是B细胞成熟的重要标志； 抗原受体。; 1）单体， 200kD 2)血清中含量最低(占Ig的0.002%)； 3)呼吸道和胃肠道浆细胞产生； 4)亲细胞抗体，介导 I 型超敏反应； 5)过敏性疾病和某些寄生虫感染 患者血清中特异性IgE水平增高。;第4节 人工制备抗体;含多种抗原表位的抗原刺激机体多个B细胞克隆产生的免疫血清（含多种抗体），称多克隆抗体。;1、多抗的制备方法;优点：作用全面，容易制备； 缺点：特异性差，批间差异大，易出现交叉反应，异物性。 第一代抗体;4.2 单克隆抗体;1、制备单抗的原理 ① DNA合成的两条途径;能在体外无限增殖传代不分泌抗体 ，不能在HAT培养基上生长;;能释放某些生长因子促进杂交瘤生长 ;④培养基;⑤杂交瘤细胞的筛选;阳性孔的检测;⑥杂交瘤细胞的克隆化;有限稀释法： 将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。 用培