羊附红细胞体特异性原制备技术研究毕业论文.docVIP

毕业论文 羊附红细胞体he Study on Preparation of Specific E.ovis Antigen 学 生：指导教师： 院 系：河北北方学院动物科技学院 专 业：动植物检疫 班 级：07级本科动检班 目录 1材料 4 1.1实验动物 4 1.2 主要试剂 4 1.3 主要仪器 4 2方法 4 2.1应用药物体外驱虫法粗制羊附红细胞体抗原 4 2.2 羊附红细胞体特异性抗原制备 7 2.2.1 羊附红细胞体抗原蛋白悬液 7 2.2.2 兔抗羊附红细胞体阳性血清的制备 7 2.2.3 兔阴性血清的制备 7 2.2.4 羊附红细胞体抗原全蛋白的SDS试验 7 2.2.5 主要抗原蛋白的切胶纯化 8 2.2.6 纯化抗原蛋白的SDS试验 8 2.2.7 纯化抗原蛋白的免疫印迹试验及特异性抗原蛋白的筛选 8 2.2.8 羊附红细胞体特异性抗原的制备 10 3 研究结果与分析 10 3.1 解离液蛋白浓度测定 10 3.2 羊附红细胞体特异性抗原制备结果 10 3.2.1兔抗羊附红细胞体阳性血清效价测定结果 10 3.2.2 羊附红细胞体抗原全蛋白的SDS分析结果 10 3.2.3 纯化抗原蛋白SDS分析结果 11 4 讨论 12 5 结论 14 参考文献： 15 致 谢 16 羊附红细胞体为了提高羊附红细胞体(Eperythrozoon ovis)血清学诊断的特异性和敏感性，本研究探索一种准确高效的羊附红细胞体特异性抗原制备技术。 采集红细胞感染率90%的羊附红细胞体阳性抗凝血，应用药物体外驱虫法（每200mL血液依次加入双向红莲灭1mL）对羊附红细胞体进行解离，制备羊附红细胞体悬液。经过超声波裂解，制备附红细胞体抗原全蛋白悬液。应用羊附红细胞体抗原蛋白裂解液免疫家兔，制备兔抗羊附红细胞体阳性血清。将所制的的抗原蛋白进行SDS试验，观察羊附红细胞体全抗原蛋白组分，选择4条染色较深的抗原蛋白进行切胶纯化，应用SDS检验纯化结果，再应用免疫印迹技术（Western-blotting）确定有免疫原性的抗原蛋白成分。利用切胶纯化技术收集有免疫原性的抗原蛋白成分。 结果表明，羊附红细胞体抗原全蛋白经SDS试验后，有4条抗原蛋白带显色较深。应用切胶技术分离此4条蛋白条带（条带1、条带2、条带3和条带4），经分析分子量分别为115.35kDa（道尔顿），74.13 kDa，68.87 kDa，32.96 kDa，免疫印迹试验表明，条带1、2、3为阳性，且条带2中只有部分成分与抗体反应，而条带4为阴性。因此，确定分子量为115.35kDa和68.87 kDa两条蛋白带为羊附红细胞体特异性抗原蛋白。；特异性抗原；切胶纯化he Study on Preparation of Specific E.ovis Antigen Abstract：To improve specificity and sensitivity of serum diagnostic method to sheep Eperythrozoonosis, an accurate, efficient and specific antigen preparation technology was explored in the study.The positive anticoagulant blood (erythrocyte infection rate 90%) for Eperythrozoon ovis was collected, and Eperythrozoon suspension was prepared using deworming methed in vitro.Eperythrozoon suspension was broke and cracked using the thawing - ultrasonic lysis method to prepare crude antigen solution. The crude antigen solution was used to immunize rabbits to prepare rabbit anti-sheep Eperythrozoon positive serum. The prepared antigen protein was adopted for SDSexperiment, the whole Eperythrozoon wenyoni antigen protein component was observed. Four deeper staining antigen proteins were selected to